一种酶法快速测定食品中硝酸盐的试纸条制造技术

本发明专利技术提供的快速测定食品中硝酸盐的试纸条利用了硝酸盐还原酶的生物化学还原方法，由硝酸盐还原酶＋还原型辅酶Ⅰ（又叫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，缩写符号为ＮＡＤＨ）系统或由硝酸盐还原酶＋还原型辅酶Ⅱ（又叫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，缩写符号为ＮＡＤＰＨ）系统催化硝酸盐还原生成亚硝酸盐。本发明专利技术提供的试纸条在快速测定食品中硝酸盐含量的场合应用。本发明专利技术提供的试纸条使用方便、专一性强、能够有助于食品中硝酸盐含量的快速测定。

【技术实现步骤摘要】
一种酶法快速测定食品中硝酸盐的试纸条
本专利技术属于检测
，涉及检测硝酸盐含量的技术，尤其涉及利用硝 酸盐还原酶将硝酸盐还原生成亚硝酸盐而快速测定食品中硝酸盐的试纸条及其 应用。技术背景目前，检测食品(包括食用农产品，下同)中硝酸盐含量意义十分重要。 硝酸盐本身没有危害但被人体摄入后可在硝酸还原细菌的作用下转化成亚硝酸 盐，亚硝酸盐可使血红蛋白丧失携氧能力，引起中毒；另外亚硝酸盐在一定情 况下可形成据有致癌作用的亚硝胺类化合物。现在食品的安全质量问题在国内 市场和出口贸易中日益受到重视。因此研究快速检测食品中硝酸盐的方法对于 无公害和绿色食品生产、贸易和市场监测具有重要意义。在硝酸盐检测的若干种方法中，Griess检测是最流行，最简单的方法之一。 Griess检测的原理为亚硝酸根离子与对氨基苯磺酸在酸性条件下发生重氮反应， 然后再与二盐酸-l-萘乙二胺发生偶联反应，生成一种紫红色的偶氮化合物，其 颜色深浅与亚硝酸盐含量成正比，再根据亚硝酸盐和硝酸盐之间的转化比例确 定不同浓度的硝酸盐所对应的颜色。但硝酸盐检测时必须先把硝酸盐先转化为 亚硝酸盐。目前，在国家标准(GB/T5009.33-2003)中用于检测硝酸盐的方法为 镉柱还原法,但此法必须在实验室中操作，并且操作冗长；镉可以挥发，对人体具有 很大的毒性。经检索文献专利可知，谢增鸿等人专利技术的蔬菜中亚硝酸盐、硝 酸盐的快速检测试纸及其检测方法(申请号03116663.6;公开号CN 1445531A),吴良欢等人专利技术的硝酸盐、亚硝酸盐快速测定试纸及其应用(申 请号200510048918.4;公开号CN 1645114A)均采用锌粒或锌粉或其它金属 还原法，此方法中，样品需要一定的前处理，专一性不太强，灵敏度不太高。 采用生物化学方法将硝酸盐还原生成亚硝酸盐并应用于硝酸盐含量的检测报道 很少。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服上述现有技术的不足，提供硝酸盐含量检测过程中更方便、专一性更强，灵敏度更高的还原方法，以更有助于硝酸盐含量的检测。本专利技术提供的硝酸盐还原生成亚硝酸盐的方法为生物化学方法，由硝酸盐还原酶+NAD (P) H系统催化硝酸盐还原生成亚硝酸盐。本专利技术提供的硝酸盐 还原生成亚硝酸盐的方法在快速测定食品中硝酸盐含量的场合应用，特别是应 用于本专利技术设计的试纸条中。本专利技术提供的方法使用方便、专一性强、能够实 现食品中硝酸盐含量的快速测定。本专利技术提供的是一种利用硝酸盐还原酶快速测定食品中硝酸盐的试纸条及 其应用，具体是1. 本专利技术涉及的试纸条中硝酸盐还原生成亚硝酸盐的方法是生物化学方 法，由硝酸盐还原酶+NAD (P) H系统催化硝酸盐还原生成亚硝酸盐。其中硝 酸盐还原酶指NADH依赖型硝酸盐还原酶(E.C丄7.7.1)或NADPH依赖型硝酸 盐还原酶(E.C丄7.7.2)。2. 本专利技术涉及的硝酸盐还原生成亚硝酸盐的方法在快速测定食品中硝酸 盐含量的场合应用，特别是应用于本专利技术设计的试纸条中。3. 本专利技术涉及的快速测定食品中硝酸盐的试纸条，由显色区和还原区组合 构成，显色区为浸有等体积N-l-萘基乙二胺二盐酸和对氨基苯磺酸、酒石酸 的混合液，还原区含有
技术实现思路
1所述的硝酸盐还原酶。具体通过以下方法制 备(1) 还原区的制备将定量滤纸剪成'0.6cmX10.0cm的长纸条，浸泡于 7000.0umo1 L—1肖酸盐还原酶、10.0,1 L—1 NAD(P)H的0. 1 mol 1/磷酸盐 缓冲液(pH7.5) 15min后，于35°0干燥或用冷风吹干，将该试纸片切割成规格 为0. 6cmX0. 8cm的试纸片；(2) 显色区的制备将定量滤纸剪成0. 6cmX 10. 0cm的长纸条，浸泡于4. 5% N附图说明附图1为本专利技术试纸条实图，(A代表显色区，B代表还原区) 附图2为硝酸盐标准色阶(mg L-l汁液重)具体实施方式本专利技术结合实例作进一步说明。 实施例1本专利技术试纸条的制备方法还原区的制备将定量滤纸剪成0.6cmX10.0cm的长纸条，浸泡于7000. 0 u mol L—'硝酸盐还原酶、10. 0,1 L-1 NAD(P)H的0. 1 mol 1^磷酸盐缓冲液 (pH7.5) 15min后，于35。C干燥或用冷风吹干，将该试纸片切割成规格为 0.6cmX0. 8cm的试纸片；显色区的制备将定量滤纸剪成0.6cmX10.0cm的长纸条，浸泡于4.5% N本文档来自技高网...

【技术保护点】
硝酸盐还原生成亚硝酸盐的方法，其特征是：该方法是生物化学方法，由硝酸盐还原酶＋ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ系统催化硝酸盐还原生成亚硝酸盐。

【技术特征摘要】
1. 硝酸盐还原生成亚硝酸盐的方法，其特征是该方法是生物化学方法，由硝酸盐还原酶+NAD(P)H系统催化硝酸盐还原生成亚硝酸盐。2. 根据权利要求1或2硝酸盐还原生成亚硝酸盐的方法，其特征是由硝 酸盐还原酶+NAD (P) H系统催化硝酸盐还原生成亚硝酸盐。其中硝酸盐还原 酶指NADH依赖型硝酸盐还原酶(E.C丄7.7.1)或NADPH依赖型硝酸盐还原酶(E.C丄7.7.2)。3. 根据权利要求1或2所述的硝酸盐还原生成亚硝酸盐的方法，应用在本 发明设计的试纸条中，在快速测定食品中硝酸盐含量的场合应用。4. 根据权利要求1或2，快速测定食品中硝酸盐的试纸条，其特征是由 显色区和还原区组合构成，显色区为浸有等体积N5. 根据权利要求4所述的快速测定食品中硝酸盐的试纸条，其特征是通...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙京新，周光宏，王世清，赵向进，高科，罗欣，张欣，
申请(专利权)人：青岛农业大学，青岛波尼亚食品有限公司，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]