一种适用于辽东楤木愈伤组织瞬时转化的方法及愈伤组织和应用技术

一种适用于辽东楤木愈伤组织瞬时转化的方法及愈伤组织和应用，属于生物技术领域。本发明专利技术为解决现有技术中辽东楤木稳定转化困难、转化周期较长的技术问题，提供一种适用于辽东楤木愈伤组织瞬时转化的方法，将侵染液(含有0.5mg/L‑1.0mg/L 2,4‑D、100μM乙酰丁香酮、3％(w/v)蔗糖和0.01％(v/v)Tween20的MS液体培养基)与辽东楤木愈伤组织进行结合，提高了辽东楤木愈伤组织瞬时转化的成功率。本发明专利技术提供的辽东楤木愈伤组织瞬时转化的方法，操作简便，设备要求低，污染率极低，转化效率和稳定性较高；所制备的转基因辽东楤木愈伤组织可应用于辽东楤木抗逆基因筛选、启动子活性研究中，为细胞工程育种和分子生物学研究提供重要材料，具有较大的应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，涉及一种愈伤组织瞬时转化的方法，以及所制备的愈伤组织和应用。

技术介绍

1、辽东楤木是五加科楤木属的一种药食两用植物，其嫩芽是一种名贵的山野菜，其叶片、根皮和树皮均可入药，中药名为“刺龙芽”，药材主产于黑龙江、吉林、辽宁。辽东楤木的主要入药成分是三萜皂苷，药理学研究表明楤木皂苷具有保护神经、提高心肌功能、抗炎、抗肿瘤的功效。

2、瞬时表达技术是将外源基因导入寄主细胞，使目的基因可在短时间内获得高水平表达或者沉默，导入的外源基因呈游离状态并不整合到寄主细胞的染色体中，因此不能稳定遗传；由于该技术的试验周期较短、基因漂移风险较低、生物安全性较高等特点，被广泛应用于研究植物基因功能。

3、研究人员为辽东楤木抗逆基因的筛选、启动子活性的研究，利用瞬时表达技术制备转基因愈伤组织，但由于不同植物的细胞结构等存在较大差异，通过现有技术中其他植物瞬时转化方法制备辽东楤木转基因愈伤组织时，存在成功率极低，转化失败的现象。

技术实现思路

1、本专利技术为解决现有技术中辽东楤木稳定转化困本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种适用于辽东楤木愈伤组织瞬时转化的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S1中所述选取的辽东楤木愈伤组织的状态为：白色、质地均匀且呈疏松颗粒状。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S1中所述的侵染液为含有0.5mg/L-1.0mg/L 2,4-D、100μM乙酰丁香酮、3％(w/v)蔗糖和0.01％(v/v)Tween20的MS液体培养基；所述MS液体培养基的pH值为5.8，所述的Tween20在过滤灭菌后再加入。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S1中所述的侵染液中还包括含有目的基...

【技术特征摘要】

1.一种适用于辽东楤木愈伤组织瞬时转化的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，s1中所述选取的辽东楤木愈伤组织的状态为：白色、质地均匀且呈疏松颗粒状。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，s1中所述的侵染液为含有0.5mg/l-1.0mg/l 2,4-d、100μm乙酰丁香酮、3％(w/v)蔗糖和0.01％(v/v)tween20的ms液体培养基；所述ms液体培养基的ph值为5.8，所述的tween20在过滤灭菌后再加入。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，s1中所述的侵染液中还包括含有目的基因表达载体的根癌农杆菌，所述侵染液的od600为0.6-0.7。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，s1中所述恒温振荡器的温度为24...

【专利技术属性】
技术研发人员：臧丹丹，段亚东，刘慧子，赵志霞，连强雷，
申请(专利权)人：中国科学院东北地理与农业生态研究所农业技术中心，
类型：发明
国别省市：