结核亚单位疫苗LT20的制备及应用制造技术

本发明专利技术公开了结核亚单位疫苗LT20的制备及应用，发明专利技术人选择细胞壁抗原肝素结合血凝黏附素HBHA免疫优势序列(HBHA<subgt;P109‑199</subgt;)和结核分枝杆菌菌毛免疫优势序列进行组合，克隆入原核表达载体，表达出无标签的融合蛋白LT20。通过离子交换层析柱纯化出LT20蛋白。采用本发明专利技术的亚单位疫苗LT20联合DP佐剂【由双十八烷基二甲基溴化铵和聚肌胞苷酸混合配制成DP佐剂】免疫小鼠，能评价亚单位疫苗的免疫原性和保护效果。本发明专利技术的亚单位疫苗LT20联合DP佐剂具有较好的免疫原性和抗分枝杆菌保护效果，应用开发前景较好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种结核亚单位疫苗及其制备方法。

技术介绍

1、结核病(tuberculosis,tb)主要由结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis，mtb)感染引起，是威胁全球公共卫生的一种慢性传染性疾病。新生儿接种卡介苗(bacillecalmette-guérin，bcg)对预防儿童粟粒型结核和结核性脑膜炎有较好的保护作用，但对成人的保护效果不佳。重组蛋白亚单位疫苗具有成分明确、安全性好、易于制备等特点。为有效防治结核病，亟需研发结核亚单位疫苗。

2、多数研究发现，结核亚单位疫苗的保护效果较好。由ag85b、esat-6和rv2660c构建的新型多期重组融合蛋白疫苗h56(ag85b-esat6-rv2660c)，在cb6f1小鼠中，相比单个抗原疫苗ag85b、esat-6和rv2660c及ag85b-esat6和bcg，h56的免疫原性和保护效果都较好。bcg接种后h56/ic31加强免疫可提高结核菌攻击后保护食蟹猴的生存率，能控制结核菌感染及潜伏性结核病。由rv1813c、rv2608、rv3619c和rv3本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种结核分枝杆菌的结核亚单位疫苗，其特征在于：包含两个抗原，通过基因工程技术将基因HBHAP109-199、Linker即抗体铰链区(EPKSCDKTHTCPPCP)、MTPP27-103重组入原核表达载体构建融合蛋白LT20。

2.根据权利要求1所述结核亚单位疫苗，其特征在于：重组融合蛋白的构建载体为pET30a，重组融合蛋白为HBHAP109-199-Linker-MTPP27-103(简称为LT20)。

3.编码权利要求1或2中所述的融合蛋白LT20的基因分子；作为优选，所述编码融合蛋白LT20的基因序列为序列表SEQ ID No.1。

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【技术特征摘要】

1.一种结核分枝杆菌的结核亚单位疫苗，其特征在于：包含两个抗原，通过基因工程技术将基因hbhap109-199、linker即抗体铰链区(epkscdkthtcppcp)、mtpp27-103重组入原核表达载体构建融合蛋白lt20。

2.根据权利要求1所述结核亚单位疫苗，其特征在于：重组融合蛋白的构建载体为pet30a，重组融合蛋白为hbhap109-199-linker-mtpp27-103(简称为lt20)。

3.编码权利要求1或2中所述的融合蛋白lt20的基因分子；作为优选，所述编码融合蛋白lt20的基因序列为序列表seq id no.1。

4.包含权利要求3所述基因的表达载体；作为优选，所述表达载体为原核表达载体；作为进一步优选，所述原核表达载体为pet30a。

5.包含权利要求4所述载体的宿主细胞；作为优选，所述宿主细胞为大肠杆菌e.colibl21(de3)。

6.根据权利要求1或2所述的结核亚单位疫苗，其特征在于：所述融...

【专利技术属性】
技术研发人员：李菲，曾青青，祝秉东，米友军，王娟，谢涛，陈丹丹，何朴，杜蕴洁，
申请(专利权)人：兰州大学，
类型：发明
国别省市：