一种肌醇氧化酶基因的克隆表达及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种肌醇氧化酶基因的克隆表达及应用，以pET‑28a（+）为载体，将肌醇氧化酶基因克隆到载体上得到重组质粒。之后转化到大肠杆菌BL21（DE3）中，得到表达肌醇氧化酶的重组大肠杆菌基因工程菌。本发明专利技术利用重组大肠杆菌来表达来自小鼠（Mus musculus）的肌醇氧化酶基因。本发明专利技术实现了小鼠来源的肌醇氧化酶在大肠杆菌中的克隆表达、分离纯化，并提供了最佳诱导表达条件及酶学性质表征。所得的重组肌醇氧化酶能够将肌醇转化为D‑葡萄糖醛酸，转化率高达91.4%。在催化反应过程中添加新鲜酶液并调节转化体系pH，D‑葡萄糖醛酸产量提升99.38%，最高可达8.07 g/L。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，尤其涉及一种肌醇氧化酶基因的克隆表达及应用。

技术介绍

1、d-葡萄糖醛酸(d-glucuronic acid)是一种天然的葡萄糖衍生物，分子式为c6h10o7，分子量为194.14，是葡萄糖c-6位上的羟基被氧化而形成的羧酸，以组织复合物的形式广泛存在于动植物中。d-葡萄糖醛酸是重要的高附加值化合物，具有广泛的抗炎抗菌和免疫调节作用，在降低胆固醇、治疗肝脏疾病、化妆护肤等领域均有广阔的应用前景。此外，d-葡萄糖醛酸是许多重要化合物的前体，如抗坏血酸、透明质酸、葡萄糖二酸等。

2、目前d-葡萄糖醛酸工业生产方法主要是硝酸氧化法，以淀粉为原料，在硝酸氧化下水解生成d-葡萄糖醛酸，该方法选择性差、副产物多、生产周期长、产物收率低，并且会造成严重的环境污染。因此，利用生物合成法生产d-葡萄糖醛酸是目前最有前途的方法。生物合成法是利用酶催化或全细胞催化d-葡萄糖醛酸的前体生成d-葡萄糖醛酸，该方法具有选择性高、环境污染少、生产周期短、成本低等优点。

3、肌醇氧化酶(myo-inositol oxygenase，miox)本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种肌醇氧化酶基因的克隆表达方法，其特征在于，以pET-28a（+）为载体，将肌醇氧化酶基因连接到载体上构建得到重组质粒，之后转化到大肠杆菌BL21（DE3）中，得到表达肌醇氧化酶的重组大肠杆菌基因工程菌，所述肌醇氧化酶核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述的肌醇氧化酶基因的克隆表达方法，其特征在于：所述肌醇加氧酶来源于小鼠(Mus musculus) ，以pET-28a(+)为表达载体，以BamHⅠ-Hind Ⅲ为克隆位点。

3.根据权利要求2所述的肌醇氧化酶基因的克隆表达方法，其特征在于：所述肌醇氧化酶经镍柱分离纯化分子量约为37...

【技术特征摘要】

1.一种肌醇氧化酶基因的克隆表达方法，其特征在于，以pet-28a（+）为载体，将肌醇氧化酶基因连接到载体上构建得到重组质粒，之后转化到大肠杆菌bl21（de3）中，得到表达肌醇氧化酶的重组大肠杆菌基因工程菌，所述肌醇氧化酶核苷酸序列如seq id no.2所示。

2.根据权利要求1所述的肌醇氧化酶基因的克隆表达方法，其特征在于：所述肌醇加氧酶来源于小鼠(mus musculus) ，以pet-28a(+)为表达载体，以bamhⅰ-hind ⅲ为克隆位点。

3.根据权利要求2所述的肌醇氧化酶基因的克隆表达方法，其特征在于：所述肌醇氧化酶经镍柱分离纯化分子量约为37kda，最适反应温度为30℃，最适反应ph为7.5，最适反应时间为2小时，在25℃、30℃条件下孵育稳定性较好，在ph8.0条件下孵育稳定性较好。金属离子na+、k+、ca2+、mg2+该酶活性无显著影响，co2+、mn2+、zn2+、cu2+、edta、sds对该酶活性具有较强的抑制作用。

4.根据权利要求1所述的肌醇氧化酶基因的克隆表达方法，其特征在于：所述核苷酸序列seq id no.2是通过对肌醇氧化酶的原始基因序列如seq id no.1所示进行密码子优化而得到的。

5.根据权利要求1-4所述的肌醇氧化酶基因的克隆表达方法，其特征在于：包括以下步骤：

6.一种重组大肠...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡广庆，张洪斌，杨静文，
申请(专利权)人：合肥工业大学，
类型：发明
国别省市：