一种重组糖肽酶及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种重组糖肽酶及其应用。涉及酶工程技术领域。提供了重组糖肽酶PNGF1及其密码子优化的编码基因、氨基酸序列，以及其表达和应用。本发明专利技术的重组糖肽酶在天然蛋白去除信号肽后，在N端融合HIS标签、TEVsite和谷胱甘肽重构N端，根据大肠杆菌密码子的偏好性优化重组糖肽酶基因，采用全基因合成并构建重组表达载体30a‑PNGF1，实现活性重组糖肽酶PNGF1高效大量的可溶性表达，从1L培养物中纯化出重组糖肽酶约59.49mg(约1.75×10<supgt;7</supgt;U)。活性重组糖肽酶PNGF1具有较高的活性，酶活力约295000U/mg。重组糖肽酶PNGF1对天然糖蛋白具有高效的去糖基作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及酶工程，更具体的说是涉及一种重组糖肽酶及其应用。

技术介绍

1、糖肽酶(peptide n-glycosidase f，pngase f，ec3.5.1.52)是一类天冬酰胺酶，pngase f的同意名称有：n-glycanase,glycopeptidase f,n-glycosidase f,peptide-n4-(acetyl-β-glucosaminyl)-asparagine amidase。糖肽酶可催化多肽上天冬酰胺残基连接的寡糖水解，将n-聚糖从n-糖蛋白上释放出来，形成游离n-聚糖，糖肽酶作为工具酶被广泛用于蛋白质糖基化研究。此外，糖肽酶还被用于糖肽类抗生素(如万古霉素和替考拉宁)无菌检查或微生物限度检测。

2、医药产品的微生物污染是重点关注的安全问题，各国药品生产管理规范和药典规定对无菌制剂的产品及其原料和中间产物必须经行无菌检查。对于具有强抑菌活性的药品进行无菌检查时，应采用相应方法消除抑菌作用。糖肽酶作用于糖肽类抗生素的酰胺键，使之失去抗生素的抗菌性，从而达到灭活的效果，以准确检测糖肽类抗生素是否含有微生物及本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种重组糖肽酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.编辑权利要求1所述的重组糖肽酶的密码子优化的基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3.一种重组载体，其特征在于：所述重组载体携带权利要求2所述的密码子优化的基因。

4.一种工程菌株，其特征在于：含有权利要求3所述的重组质粒。

5.一种重组糖肽酶的制备方法，其特征在于：对权利要求4所述的工程菌株进行诱导表达，收集并纯化所表达的重组蛋白，即得到所述重组糖肽酶。

6.一种重组糖肽酶酶制剂，其特征在于，包含权利要求1所述的重组糖肽酶。<...

【技术特征摘要】

1.一种重组糖肽酶，其特征在于，其氨基酸序列如seq id no：1所示。

2.编辑权利要求1所述的重组糖肽酶的密码子优化的基因，其特征在于，核苷酸序列如seq id no：2所示。

3.一种重组载体，其特征在于：所述重组载体携带权利要求2所述的密码子优化的基因。

4.一种工程菌株，其特征在于：含有权利要求3所述的重组质粒。

5.一种重组糖肽酶的制备方法，其特征在于：对权利要求4所述的工程菌株进行诱导表达，收集并纯化所表达的重组蛋白，即得到所述重组糖肽酶。

6.一种重组糖肽酶酶制剂，其特征在于，包含权利要求1所述的重组糖肽酶。

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【专利技术属性】
技术研发人员：马爱进，陈伟，贾英民，
申请(专利权)人：北京工商大学，
类型：发明
国别省市：