一种用于普瑞巴林手性中间体合成的固定化腈水解酶及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及固定化酶技术领域，公开了一种用于普瑞巴林手性中间体合成的固定化腈水解酶及其制备方法和应用。该制备方法包括以下步骤：通过氨基与环氧基之间的开环反应，将α‑羧基‑ω‑缩水甘油基聚乙二醇接枝到带有氨基的金属有机框架上，获得COOH‑PEG‑MOF；通过氮丙啶交联剂与羧基之间的反应，在腈水解酶与COOH‑PEG‑MOF之间形成共价连接，获得固定化腈水解酶。本发明专利技术制得的固定化腈水解酶中，酶与MOF之间具有较高的结合强度，同时，酶具有较高的自由度，且底物和产物易于在酶与MOF之间的空隙中扩散，因而能够较好地兼顾固定化后的酶活和重复使用性能。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及固定化酶，尤其涉及一种用于普瑞巴林手性中间体合成的固定化腈水解酶及其制备方法和应用。

技术介绍

1、普瑞巴林(pregabalin)化学名称(s)-3-氨甲基-5-甲基己酸，分子式为c8h17no2，是一种γ-氨基丁酸(gaba)类似物，能够竞争性地结合gaba受体，抑制兴奋传导，因而具有抗癫痫、抗惊厥、镇痛和抗焦虑活性。

2、普瑞巴林的化学-酶法合成具体过程如下：先在腈水解酶的催化下，将外消旋的异丁基丁二腈(3-氰基-5-甲基己腈)选择性地水解为手性中间体(s)-3-氰基-5-甲基己酸；而后在ni催化剂的作用下，(s)-3-氰基-5-甲基己酸发生加氢还原，转化为普瑞巴林；在腈水解的过程中，未参与反应的(r)-3-氰基-5-甲基己腈可在碱催化剂作用下外消旋化，再次进行腈水解反应。

3、在手性中间体的酶法合成过程中，游离的腈水解酶在完成反应后，无法从反应体系中分离出来，难以实现回收利用，且酶活性易受到外界环境的影响。采用能够表达腈水解酶的细胞或者固定化细胞参与反应，能够解决腈水解酶的回收利用问题，并减弱外界环境对酶活性的本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于普瑞巴林手性中间体合成的固定化腈水解酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S1的具体过程包括：将带有氨基的金属有机框架和α-羧基-ω-缩水甘油基聚乙二醇分散在反应溶剂B中，进行开环反应，分离出产物，获得COOH-PEG-MOF。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述α-羧基-ω-缩水甘油基聚乙二醇中，聚乙二醇的重均分子量为500~2000。

4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述带有氨基的金属有机框架与α-羧基-ω-缩水甘油基聚乙...

【技术特征摘要】

1.一种用于普瑞巴林手性中间体合成的固定化腈水解酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤s1的具体过程包括：将带有氨基的金属有机框架和α-羧基-ω-缩水甘油基聚乙二醇分散在反应溶剂b中，进行开环反应，分离出产物，获得cooh-peg-mof。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤s1中，所述α-羧基-ω-缩水甘油基聚乙二醇中，聚乙二醇的重均分子量为500~2000。

4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤s1中，所述带有氨基的金属有机框架与α-羧基-ω-缩水甘油基聚乙二醇的质量比为1：0.1~0.3。

5.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤s1中，所述带有氨基的金属有机框架的制备方法包括以下步骤：将摩尔比为1：2.5~5.5的2-氨基对苯二甲酸和对甲基苯甲酸分散到反应溶剂a中，加入锆盐，进行晶化反应，分离出产物，获得带有氨基的金属有机框架。...

【专利技术属性】
技术研发人员：庄程翰，刘击，赫亚征，张飞霆，叶素斌，刘永权，
申请(专利权)人：浙江普洛家园药业有限公司，
类型：发明
国别省市：