一株降解TSNAs的解淀粉芽胞杆菌工程菌及其构建方法和应用技术

本发明专利技术提供了一株降解TSNAs的解淀粉芽胞杆菌工程菌及其构建方法和应用。其中，所述工程菌HZ‑12ΔnarG通过解淀粉芽胞杆菌HZ‑12利用基因工程的方法敲除了其基因组内的编码硝酸盐还原酶的基因narG获得，且工程菌HZ‑12ΔnarG显著提高了解淀粉芽胞杆菌HZ‑12对烟叶中TSNAs的降解能力，并且提高了发酵后烟草制品的香气质，降低了杂气，提升了发酵后雪茄烟的感官品质。经试验，发酵前解淀粉芽胞杆菌HZ‑12不具有降解烟叶中TSNAs的能力，工程菌HZ‑12ΔnarG可降解烟叶中的TSNAs，且对其中的NNN、NNK、NAT和NAB的降解率分别为35%、52%、46%和47%。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程领域，尤其是一株降解tsnas的解淀粉芽胞杆菌工程菌及其构建方法和应用。

技术介绍

1、烟草特有亚硝胺（tsnas）是一类主要存在于烟草、烟草制品及烟气中的危害人类健康的物质，主要包括n-亚硝基烟碱（nnn）、4-（甲基亚硝胺）-1-（3-吡啶基）-1-丁酮（nnk）、n-亚硝基新烟草碱（nat）和n-亚硝基假木贼碱（nab），其中nnn和nnk是国际癌症研究机构（iarc）认证的直接致癌物质。

2、生物碱和亚硝酸盐是合成tsnas的直接前体物，新鲜的烟草叶片中含有足够的生物碱来合成tsnas，所以在新鲜的烟叶中亚硝酸盐不积累或是痕量存在的，硝酸盐的积累量与其施加的叶面肥相关。因此，影响烟草中tsnas含量的关键因素可能是亚硝酸盐含量。在烟叶的成熟阶段，酶和微生物会将硝酸盐还原为亚硝酸盐。因此，在烟叶加工过程中抑制亚硝酸盐的产生可能是减少烟草制品中tsnas含量的有效策略。

3、目前已经研究过物理方法、烟草育种方法和微生物方法来降低tsnas，例如，lussom.等人提供了一种选择性降低卷烟填料和主流烟气中nn本文档来自技高网...

【技术保护点】

1. 一株降解TSNAs的解淀粉芽胞杆菌工程菌，其特征在于，由解淀粉芽胞杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）HZ-12敲除了其中编码硝酸盐还原酶的基因narG得到，其中，所述解淀粉芽胞杆菌HZ-12的保藏编号是CCTCC NO:M 2015234。

2. 根据权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述基因narG的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。

3.一株权利要求1或2所述的工程菌的构建方法，利用同源重组法敲除所述解淀粉芽胞杆菌HZ-12中编码硝酸盐还原酶的基因narG。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，包括步...

【技术特征摘要】

1. 一株降解tsnas的解淀粉芽胞杆菌工程菌，其特征在于，由解淀粉芽胞杆菌（bacillus amyloliquefaciens）hz-12敲除了其中编码硝酸盐还原酶的基因narg得到，其中，所述解淀粉芽胞杆菌hz-12的保藏编号是cctcc no:m 2015234。

2. 根据权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述基因narg的核苷酸序列如seq idno.1所示。

3.一株权利要求1或2所述的工程菌的构建方法，利用同源重组法敲除所述解淀粉芽胞杆菌hz-12中编码硝酸盐还原酶的基因narg。

4.根据权利要求3所述的构建方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶长文，董欣雨，黄阔，魏雪团，张鸽，李青常，韩震颖，尉清如，李栋，牛晨启，陈宸，贺琛，
申请(专利权)人：中国烟草总公司郑州烟草研究院，
类型：发明
国别省市：