一种敲低β-1,2-Xylosyltransferase表达构建人源化烟草底盘的方法技术

技术编号:42371994 阅读:58 留言:0更新日期:2024-08-16 14:54
本申请提供一种利用基因工程手段沉默植物β‑1,2‑木糖基转移酶基因(β‑1,2‑Xylosyltransferase)表达,构建人源蛋白糖基修饰烟草底盘的方法,包括选取特异CXT1P基因片段序列,构建CXT1P基因RNAi载体,转化烟草;利用基因工程技术手段下调CXT1P表达水平,由此沉默烟草细胞对合成蛋白的植物糖基化水平,故而为构建具有人源化修饰功能的烟草底盘提供新的方案。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种核糖核酸酶基因领域,更具体地,为一种敲低β-1,2-xylosyltransferase表达构建人源化烟草底盘的方法。


技术介绍

1、植物作为重组蛋白生产的系统,其糖基化模式与动物细胞存在显著差异,这一差异可能影响蛋白质的稳定性、溶解性、正确折叠和生物活性,甚至可能引起免疫原性和过敏反应。(liénard et al.2007;schiermeyer 2020)。植物细胞在糖基化过程中倾向于利用木糖(xylose)和海藻糖(trehalose),而哺乳动物细胞则特有半乳糖(galactose)和硅铝酸(syalic acid)(lico et al.2008)。尽管这限制了植物特别是烟草等模式植物(nicotianatabacum)在生产药用蛋白和分子农场开发方面的应用,但随着分子生物学研究的深入和基因工程技术的发展,这一问题有了可行的解决方案。通过敲除或抑制植物内源糖基(α-1,3-海藻糖和β-1,2-木糖)转移酶基因的表达(strasser et al.2005;liénard et al.2007)、突变重组蛋白的糖基化位点(nut本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种敲低β-1,2-Xylosyltransferase表达构建人源化烟草底盘的方法,包含以下步骤:

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,还具有以下至少一项特征:

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,还具有以下至少一项特征:

4.一种CXT1P基因片段,所述CXT1P基因片段具有如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。

5.一种RNAi载体,所述RNAi载体包含权利要求4所述的CXT1P基因片段,优选的,所述RNAi载体为将权利要求4所述的CXT1P基因片段克隆至pHELLSGATE12载体构建得到。</p>

6.一种...

【技术特征摘要】

1.一种敲低β-1,2-xylosyltransferase表达构建人源化烟草底盘的方法,包含以下步骤:

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,还具有以下至少一项特征:

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,还具有以下至少一项特征:

4.一种cxt1p基因片段,所述cxt1p基因片段具有如seq id no.2所示的核苷酸序列。

5.一种rnai载体,所述rnai载体包含权利要求4所述的cxt1p基因片段,优选的,所述rnai载体为将权利要求4所述的cxt1p基因片段克隆至phellsgate12载体构建得到。

6.一种烟...

【专利技术属性】
技术研发人员:汪阳忠周梦茜费婷陈敏熊骏威吴达
申请(专利权)人:上海烟草集团有限责任公司
类型:发明
国别省市:

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