肺癌遗传检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术提供了一种肺癌遗传风险基因位点检测试剂盒，由包装盒体１、衬垫２、装有检测六个ＳＮＰ位点的荧光定量ＰＣＲ反应液的六个试管３、装有阳性对照品的一个试管４、装有阴性对照品的一个试管５组成，衬垫上设有容器孔，分别放置六管荧光定量ＰＣＲ反应液３、阳性对照品４和阴性对照品５。本实用新型专利技术试剂盒运用荧光定量ＰＣＲ技术实现了同时检测六个肺癌遗传风险基因ＳＮＰ位点基因型的目的，相对于现有的荧光定量ＰＣＲ试剂盒只检测一个ＳＮＰ位点，本实用新型专利技术试剂盒将与同一疾病相关的六个ＳＮＰ位点检测整合在一个试剂盒内，使用更方便而且成本更低，对肺癌遗传风险的结果分析也更便捷。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术属生物
，具体涉及一种肺癌遗传风险基因位点检测试剂盒，是通过利用荧光定量 PCR,检测基因组DNA样本中的六个肺癌遗传风险基因SNP位点基因型的试剂盒。
技术介绍
肺癌是最常见的肺原发性恶性肿瘤，由于绝大多数肺癌起源于支气管粘膜上皮，也称支气管肺癌。肺 癌发病早期症状缺乏特征性且较复杂，只有少部分患者会有症状。这与肿瘤生长的位置有关，如果长在支 气管内，会阻塞气体的出入，并刺激支气管壁，而造成咳嗽，有时会咳出带血丝的痰。如果长在肺的其它 部位，只有靠X线检查才能发现。因为肺部是人体进行气体交换的重要部位，血流充足，血液循环快，淋 巴腺多，所以肺癌特别容易转移，当发现时往往病情难以控制。如果病人出现胸痛、胸闷或关节痛等症状 时，说明已经进入肺癌中晚期，甚至癌细胞已出现转移。肺癌的形成与遗传、环境、行为生活方式因素的共同作用密不可分。虽然遗传因素不可改变，但及早 检测出是否存在患肺癌的遗传风险，可以在未发生症状之前通过定期的身体检査尽早发现和尽早治疗；还 可以通过控制饮食、改善生活习惯等干预手段，弥补遗传风险。这对于肺癌的防治具有十分重大的意义。研究表明，肺癌的发病与细胞色素P450 1A1基因(CYP1A1)上的Ile462Val位点、Mspl位点、细胞 色素P450 2D6基因(CYP2D6)上的C188T位点、X射线交错互补修复基因1 (XRCC1)上的Arg399Gln位 点、基质金属蛋白酶1基因(MMP1)上的1G/2G位点、5， 10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)上的C677T 位点这六个SNP位点基因型有很密切的关系。大量研究显示，CYP1A1基因与环境因素的交互作用会影响各种癌症的发病风险。CTP1A1作为重要解 毒酶在肺组织中有大量表达，由于吸烟等外界环境因素刺激下表达量增大，而烟草中所含的多环芳烃类物 质经CYP1A1代谢成各种高活性的致癌物质，若下游的II相代谢酶的活性不足，会使得致癌物质在肺中蓄 积，易导致肺癌的发生。因此，CYP1A1基因多态性导致的酶活性异常增强会显著提高前致癌物的激活效率， 是肺癌发病的重要风险因素。1le462Val是位于该基因第7号外显子处的A/G多态位点，引起第462号密 码子编码的lie变为Val，由于该多态位点位于CYP1A1的血红素结合区，因此影响了血红素与编码蛋白的 结合，具有提高酶活性的作用。该多态位点有三种基因型11e/Ile、 Ile/Val和Val/Val,当个体携带 11e/Val和Val/Val基因型时，CYP1A1的酶活性显著增强，对多环芳烃类物质的激活作用增强，因此转化 生成的高活性致癌物质增多，提高了肺组织细胞癌变风险，引起肺癌的发病风险升高。M印I酶切多态是 CYP1A1另一个最常见的多态位点之一，位于3'端非编码区多聚腺嘌昤下游264bp处,为T/C置换(T3801C)。 该多态常见的等位基因为ml、 m2， m2 (C等位基因)可被限制性核酸内切酶M印I识别，而ml (T等位基 因)则不能识别。三种基因型为ml/ml(TT)、 ml/m2(TC)、 m2/m2(CC)，当个体携带m2/m2基因型时，CYP1A1 的诱导活性增强，即容易受到环境致癌物的影响，从而诱导产生更多的CYP1A1，引起致癌物质的活化加速， 若其它解毒酶不能及时将该类物质代谢排出，则会造成DNA损伤和细胞畸变，增加患癌症的风险。，CYP2D6基因上存在着多个多态位点，多态位点的分布具有种群特异性。通常，根据CYP2D6代谢能 力不同，可分为四个亚型，分别为超强代谢型(UM)、强代谢型(EM)、中间代谢型(HEM)和弱代谢型(PM)， 其中弱代谢型在欧美白种人中较为常见，而强代谢型则在亚洲人中较为常见。CYP2D6酶活性增强使机体对 环境致癌物敏感度增强，与肺癌的易感性上升有关。C188T位点为CYP2D6基因第1号外显子处的一个C/T 多态，该多态造成表达的蛋白第34位的脯氨酸变成丝氨酸(Pro34Ser),导致生成酶的活性下降。该位点 有三种基因型，分别为CC、 CT、 TT，当个体携带CT和CC基因型时，相对TT基因型，CYP2D6的酶活性增 强，对香烟中的前致癌物的激活作用增强，因此转化生成的高活性致癌物质增多，提高了肺组织细胞癌变 风险，引起肺癌发病风险的升高。目前，在XRCC1基因中共发现3个单核苷酸多态(SNP)，分别是Argl94Trp、 Arg280His和Arg399Gln。 三者都位于外显子中，氨基酸序列的改变会导致蛋白质高级结构的改变，从而影响XRCC1蛋白与其它酶的 结合能力，最终影响机体修复损伤DNA的能力。若DNA损伤修复能力发生下调，则易发生体细胞癌变，各种癌症的发病风险因此上升。目前的研究证实，XRCC1基因多态性与肿瘤的发生密切相关。Arg399Gln位 点是该基因第10号外显子上的一个G/A多态位点，弓|起XRCC1基因编码蛋白的第399个氨基酸由Arg变 为Gln，该氨基酸处于BRCT I区域。A、 G是该位点的两个等位基因，前者会增强XRCC1蛋白与DNA-致癌 物加合物的结合能力。该位点有三种基因型Gln/Gln (AA) 、 Gln/Arg (AG) 、 Arg/Arg (GG)，当携带AA 基因型时，XRCC1基因BRCT I功能域的空间构象发生改变，导致XRCC1蛋白不能正常结合于DNA受损处， 而影响PARP1的活性，最终使得碱基切除修复能力被削弱，DNA损伤增多，体细胞癌变增多，各种肿瘤的 患病风险升高。肺是与环境致癌物接触较多的部位，容易发生DNA损伤和体细胞突变，若碱基切除修复能 力下调，则肺癌的患病风险会升高。有研究显示，MMP1增加肿瘤的遗传易感性可能主要是通过细胞微环境的改变以此来影响细胞的转化与 肿瘤的发生。例如，MMPs可降解胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBPs)，从而释放出胰岛素样生长因子 (IGFs),而IGFs可强烈地促进细胞增殖并抑制细胞凋亡；此外，MMPs还可能释放出转化生长因子-a (TGF-a)的细胞膜结合前体，而TGF-a是另一种重要的与细胞转化和癌症发生有关的生长因子。MMPs还可以 通过降解细胞表面的黏附分子，继而改变细胞周期调控，通过影响细胞黏附来促进基因组的不稳定性，干 扰细胞的信号传导并促使细胞逃避免疫监视。肺是人体血氧交换的重要场所，其中血管及淋巴管较为密集， 营养物质供应充分，易发生肿瘤细胞的转移，因此参与细胞活动性调控的MMP1可能为肺癌形成及恶化的 重要影响因素。1G/2G是MMP1基因启动子上游-1607bp处的一个碱基插入多态，与该基因的转录调控有关。 在此多态性位点中，原序列(5' -GAT-3' , 1G)插入一个G时会形成一个新的序列(5' -GGAT-3' ， 2G)， 这个新序列是Est转录因子的核心序列，已经证明在黑素瘤细胞和正常成纤维细胞等细胞中2G纯合基因 型会使MMP1的转录水平增高。该位点有三种基因型，分别为1G/1G、 1G/2G、 2G/2G，当个体携带1G/2G和 2G/2G基因型时，剛P1诱导活性增强，使得同等转录条件下MMP1生成量加大，引起特定组织结构趋于松 散，肿瘤细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肺癌遗传风险基因位点检测试剂盒，其特征是由包装盒体（１）、衬垫（２）、装有检测六个ＳＮＰ位点的荧光定量ＰＣＲ反应液的六个试管（３）、装有阳性对照品的一个试管（４）、装有阴性对照品的一个试管（５）组成，衬垫（２）上设有容器孔，分别放置六管荧光定量ＰＣＲ反应液（３）、阳性对照品（４）和阴性对照品（５）。

【技术特征摘要】
1.一种肺癌遗传风险基因位点检测试剂盒，其特征是由包装盒体(1)、衬垫(2)、装有检测六个SNP位点的荧光定量PCR反应液的六个试管(3)、装有阳性对照品...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯哲民，邹祖烨，
申请(专利权)人：上海主健生物工程有限公司，
类型：实用新型
国别省市：31[中国|上海]