一种自动化全定量拉曼分析方法技术

一种自动化全定量拉曼分析方法，包括以下步骤：a)利用拉曼显微镜测量被测样品，获取其拉曼光谱数据；b)对获取的拉曼光谱数据进行预处理，其中，消除非特定背景信号伪影，得到高清晰度和信噪比的拉曼光谱，同时保留1800‑2700cm<supgt;‑1</supgt;的生物“沉默区”在内的整个拉曼光谱范围；c)通过类似非负最小二乘回归的解谱算法对拉曼光谱进行解谱处理；d)将每个输入拉曼光谱解谱为多种物质的纯物质子谱后，生成包含被分析物质2D分布与定量浓度分布信息的2D图片。本发明专利技术扩展了分析范围，包含了之前被忽略的拉曼沉默区，可以分析更多类型的物质；实现了自动化分析，能够一次性处理上百万个拉曼光谱，定量分析被分析物质，极大地节省了处理时间，提高了处理效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种自动化全定量拉曼分析方法。

技术介绍

1、传统的基于荧光的共焦成像和原位杂交根据特定标记进行亚细胞水平上生物分子可视化。然而，虽然有多种探针来标记特定的蛋白质和核酸序列，但其他类别的生物分子(包括碳水化合物、脂质和代谢物)通常更难以可视化。此外，由于所谓的色障，大多数依赖标签的技术只能同时研究样本中有限数量的目标。此外，生物分子的原位定量具有挑战性，只能以相对单位(例如平均荧光强度)间接进行。

2、荧光分析方法存在如下缺点：1.样品切片，荧光入射深度有限，只能对2d薄片进行分析。2.需要荧光染料进行标记，使用多种探针来标记特定的蛋白质和核酸序列。3.耗时长，需要进行细胞固定、透化、封闭、一抗孵化、二抗孵化、复染等处理步骤，通常需要12-48小时。4.大部分生物分子无法标记，多数生物分子不具有相对应的生物靶向标记位。5.

3、无法同时观测多种生物分子，由于固有的宽荧光光谱重叠，通常只能同时成像4–5种颜色。6.无法得到绝对含量，缺乏可靠的校准标准，只能根据平均荧光强度得到相对单位。

4、拉曼光谱成像是一种本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种自动化全定量拉曼分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括以下步骤：e)通过分层拍摄并逐层进行拉曼光谱测量，将所有2D图片重构成3D图片；优选地，还可以包括：f)对被测样品进行多时间点位拉曼光谱分析，以实现4D拉曼成像。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述解谱算法为有非负约束的线性最小二乘法，用于处理拉曼光谱数据并计算得到每种物质的含量，其中，求解如下最小化问题：

4.根据权利要求1至3任一项所述的方法，其特征在于，步骤b)具体包括：

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在...

【技术特征摘要】

1.一种自动化全定量拉曼分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括以下步骤：e)通过分层拍摄并逐层进行拉曼光谱测量，将所有2d图片重构成3d图片；优选地，还可以包括：f)对被测样品进行多时间点位拉曼光谱分析，以实现4d拉曼成像。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述解谱算法为有非负约束的线性最小二乘法，用于处理拉曼光谱数据并计算得到每种物质的含量，其中，求解如下最小化问题：

4.根据权利要求1至3任一项所述的方法，其特征在于，步骤b)具体包括：

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤b)中，在宇宙射线去除过程中，通过设置梯度阈值，优选阈值为8，...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵晓宇，
申请(专利权)人：赵晓宇，
类型：发明
国别省市：