基于RAA-CRISPR/Cas13a技术检测布鲁氏菌的引物组、试剂盒和方法技术

本发明专利技术涉及微生物检测技术领域，具体涉及基于RAA‑CRISPR/Cas13a技术检测布鲁氏菌的引物组、试剂盒和方法。本发明专利技术基于RAA技术与CRISPR/Cas13a检测技术相结合的检测方法，开发了检测布鲁氏菌DNA的引物组和试剂盒，该引物组能够实现高效特异的RAA扩增和CRISPR检测，由此建立的试剂盒和检测方法具有灵敏度高、特异性强、准确性高的优势，且检测时间短，操作步骤简便，无需大型核酸扩增仪器，检测成本低，能够实现对布鲁氏菌核酸的快速、高效检测，具有较好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物检测，尤其涉及基于raa-crispr/cas13a技术检测布鲁氏菌的引物组、试剂盒和方法。

技术介绍

1、布鲁氏菌病（brucellosis）是一种由布鲁氏菌（brucella）引起的人畜共患传染变态反应性疾病。布鲁氏菌能够感染人类和动物，严重时可使人丧失劳动能力，家畜奶量减产、空怀、流产等。布鲁氏菌病的流行严重影响人体健康与畜牧业发展。目前实验室常用的布鲁氏菌病诊断方法主要分为三种：细菌分离培养、血清学诊断以及基于核酸的分子生物学检测方法。细菌分离培养是诊断布鲁氏菌病的“金标准”，但其所需要的实验室条件要求较高，需具有三级生物安全实验室才可进行实验，对实验室人员操作技术都有较高以及较为严格的要求。目前较为常用的血清学诊断方法包括虎红平板凝集试验（rose bengalplate test，rbpt）、试管凝集试验（standard tube agglutination test，sat）等。rbpt操作简便，检测所需时间短，但结果判定主要依据实验室人员的主观判断，很难在不同实验室中制定统一的判断标准，结果易出现假阳性或假阴性等情况，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.用于布鲁氏菌检测的引物组，其特征在于，所述引物组包含：RAA扩增引物对以及crRNA；

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述RNA聚合酶识别序列为T7 RNA聚合酶识别序列。

3.根据权利要求1或2所述的引物组，其特征在于，所述正向引物的核苷酸序列如SEQID NO.3所示。

4.用于布鲁氏菌检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1~3任一项所述的引物组。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含选自重组酶、单链结合蛋白、DNA聚合酶、dNTP、Cas13a蛋白、NTP Mix、T7 RNA聚合...

【技术特征摘要】

1.用于布鲁氏菌检测的引物组，其特征在于，所述引物组包含：raa扩增引物对以及crrna；

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述rna聚合酶识别序列为t7 rna聚合酶识别序列。

3.根据权利要求1或2所述的引物组，其特征在于，所述正向引物的核苷酸序列如seqid no.3所示。

4.用于布鲁氏菌检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1~3任一项所述的引物组。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含选自重组酶、单链结合蛋白、dna聚合酶、dntp、cas13a蛋白、ntp mix、t7 rna聚合酶、rna酶抑制剂、报告rna、hepes缓冲液、氯化镁、水和阳性标准质粒中的一种或多种。

6.权利要求1~3任一项所述的引物组或权利要求4或5所述的试剂盒的以下任一种应用：

7.一种非疾病诊断目的的检...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜海，任锋，刘海雯，徐玲，范玉，徐晴晴，朴东日，赵鸿雁，李鲲，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所，
类型：发明
国别省市：