一种用于检测虹彩病毒和细菌双重病原的环介导等温扩增的引物、试剂盒及可视化检测方法技术

本发明专利技术涉及分子生物学检测技术领域内一种用于检测虹彩病毒和细菌的双重病原的环介导等温扩增的引物、试剂盒及可视化检测方法，本明首先设计用于虹彩病毒和嗜水气单胞菌检测的四对引物序列如表1，并建立用于环介导等温扩增的试剂盒及扩增体系，检测时首先通过DNA提取试剂盒提取待测离体样品组织DNA；基于试剂盒建立扩增体系，于60‑65℃中水浴中反应30‑60 min，扩增反应结束后通过肉眼目测扩增反应后的体系的颜色，进行阴性或阳性判定，并对阳性样品进一步通过酶切鉴定定性判定病原结果，实现快速、便捷、高灵敏性的双重病原检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学检测，特别涉及一种用于检测虹彩病毒和细菌双重病原的环介导等温扩增的引物、试剂盒及可视化检测方法。

技术介绍

1、环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification technology)是核酸体外扩增技术，其反应过程始终维持在恒定的温度下，通过添加不同活性的酶和各自特异性引物来达到快速扩增核酸的目的。与其他的核酸扩增技术相比，等温扩增有快速、高效、特异的优点且无需专用的设备，所以它一经出现就被许多学者认为是一种有可能与pcr媲美的检测方法。

2、环介导等温扩增技术是针对靶基因上的六个区域设计四条引物，利用链置换型dna聚合酶在恒温条件下进行扩增反应，可在60 min内实现109-1010倍的扩增，反应能产生大量的扩增产物即焦磷酸镁白色沉淀，可以通过肉眼观察白色沉淀的有无来判断靶基因是否存在。该方法的优势除了高特异性和高灵敏度外，操作还十分的简单，在应用阶段对仪器的要求低，一个简单的恒温装置就能实现反应，结果检测也非常简单，直接肉眼观察白色沉淀或者染料显色即可。

3本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于检测虹彩病毒和细菌双重病原的环介导等温扩增的引物，其特征在于，包括如下4对引物序列：

2. 一种用于虹彩病毒和细菌双重病原检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒内组份包括ISKNV F3（10 μM）0.5 μL、ISKNV B3（10 μM） 0.5 μL、ISKNV FIP（100 μM）0.4 μL、ISKNV BIP（100 μM）0.4 μL、AH F3（10 μM） 0.5μL、AH B3（10 μM） 0.5 μL、AH FIP（100 μM）0.4 μL、AH BIP（100 μM） 0.4 μL 、Buffer（10×） 2.5 μL、甜菜碱（5 ...

【技术特征摘要】

1.一种用于检测虹彩病毒和细菌双重病原的环介导等温扩增的引物，其特征在于，包括如下4对引物序列：

2. 一种用于虹彩病毒和细菌双重病原检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒内组份包括isknv f3（10 μm）0.5 μl、isknv b3（10 μm） 0.5 μl、isknv fip（100 μm）0.4 μl、isknv bip（100 μm）0.4 μl、ah f3（10 μm） 0.5μl、ah b3（10 μm） 0.5 μl、ah fip（100 μm）0.4 μl、ah bip（100 μm） 0.4 μl 、buffer（10×） 2.5 μl、甜菜碱（5 m） 5 μl、dntp(10mm) 2.0-4.5 μl、 bst聚合酶（8 u/μl） 1 μl、mgso4（100 mm）1.5-2.5 μl、hnb（1.5mm）2 μl，待测液1 μl，余量用ddh2o补充至试剂盒总量为25 μl。

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【专利技术属性】
技术研发人员：刘晓丹，贺笑，安振华，徐苏南，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：