基于5-ALA转录因子的微生物全细胞传感器及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开一种基于5‑ALA转录因子的微生物全细胞传感器及其构建方法和应用，属于分子生物学技术领域。本发明专利技术通过关键氨基酸位点的饱和诱变和正负交替筛选，创造性地将响应L‑天冬酰胺的AsnC转录因子转化为响应5‑ALA的转录因子，并且构建了5‑ALA响应荧光蛋白报告载体和微生物全细胞传感器，可对样品中5‑ALA进行定性和定量检测，并且可用于筛选生产5‑ALA的酶、代谢途径和细胞。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学，具体涉及一种基于5-ala转录因子的微生物全细胞传感器及其构建方法和应用。

技术介绍

1、5-氨基乙酰丙酸(5-ala)是一种非蛋白类氨基酸，同时也是所有四吡咯化合物的共同前体，包括叶绿素、血红素和维生素b12。作为一种内源性物质，它对人畜无毒，在环境中易降解，无残留，近年来受到广泛关注并在各领域都做出许多贡献。在农业领域，5-ala被认为是一种植物生长促进激素，可以调节高等植物的种子萌发和营养生长，也有助于果实着色。类似的，5-ala用作动物饲料添加剂可以改善牲畜的铁状况，包括提升血红蛋白浓度、血清铁含量等。在医疗领域，作为光敏剂原卟啉ix的前体，5-ala成功地用于脑膜瘤、髓母细胞瘤、外胚瘤和转移癌等肿瘤的治疗。与化学方法相比，5-ala的生物合成作为绿色、可持续、可再生和廉价的技术具有许多优点。随着合成生物学的发展，细胞工厂的概念新兴，开发定向生产5-ala的工程菌是5-ala生物合成研究的核心。目前，谷氨酸棒杆菌、大肠杆菌和酿酒酵母是利用代谢工程策略合成5-ala最常用的菌株。另外，天蓝色链霉菌、丙酸丙酸杆菌、希瓦氏菌和枯本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种5-ALA特异性转录因子，其特征在于，所述5-ALA特异性转录因子是在响应L-天冬酰胺的AsnC转录因子基础上存在如下至少一种形式的氨基酸突变：

2.一种编码权利要求1所述的5-ALA特异性转录因子的核苷酸序列。

3.一种5-ALA响应荧光蛋白报告载体，所述报告载体包括权利要求2所述的5-ALA特异性转录因子基因。

4.一种5-ALA响应荧光素酶报告载体的构建方法，所述方法包括利用核酸内切酶将组成型启动子、权利要求2所述的5-ALA特异性转录因子基因、特异性启动子和荧光蛋白基因导入质粒中形成5-ALA响应荧光素酶报告载体。</p>

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【技术特征摘要】

1.一种5-ala特异性转录因子，其特征在于，所述5-ala特异性转录因子是在响应l-天冬酰胺的asnc转录因子基础上存在如下至少一种形式的氨基酸突变：

2.一种编码权利要求1所述的5-ala特异性转录因子的核苷酸序列。

3.一种5-ala响应荧光蛋白报告载体，所述报告载体包括权利要求2所述的5-ala特异性转录因子基因。

4.一种5-ala响应荧光素酶报告载体的构建方法，所述方法包括利用核酸内切酶将组成型启动子、权利要求2所述的5-ala特异性转录因子基因、特异性启动子和荧光蛋白基因导入质粒中形成5-ala响应荧光素酶报告载体。

5.一种权利要求3所述的5-ala响应荧光素酶报告载体在制备5-ala响应微生物全细胞传感器中的应用。

6.一种5-ala响...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭明璋，苏宏菲，陈诗静，刘慧琳，罗云波，
申请(专利权)人：北京工商大学，
类型：发明
国别省市：