一种基于邻位连接的用于检测低丰度生物标志物蛋白定量的单分子检测分析方法技术

技术编号:42307276 阅读:22 留言:0更新日期:2024-08-14 15:53
本发明专利技术提供一种基于邻位连接的用于检测低丰度生物标志物蛋白定量的单分子检测分析方法,解决了现有基于PLA的实时荧光定量PCR检测方法灵敏度低、精确度低的技术问题。本发明专利技术将反应体系平均分为众多微液滴体系,在微液滴内部完成QPCR或者PCR循环扩增反应,实现信号放大,从而精确定量蛋白浓度。本发明专利技术将反应体系平均分布于众多液滴体系中,通过核酸扩增技术对其进行信号扩增,从而提高液滴中低浓度蛋白的信号检出率,可进行多重蛋白检测定量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测,具体而言,涉及一种基于邻位连接的用于检测低丰度生物标志物蛋白定量的单分子检测分析方法


技术介绍

1、病原体和宿主生物标志物的定量对于疾病的诊断、监测和治疗至关重要。纵向生物标志物分析需要快速样品处理,能够检测样品之间的微小差异(即高分辨率)和低浓度的分析物(即低检测限),同时使用尽可能少的生物样品。需要高分辨率来确定不同时间点的不同读数是否对应于真正的生物学差异或测量噪声。然而,大多数用于细胞因子定量的市售分子检测平台都是基于elisa,其灵敏度通常较差,不适合与其他类型的生物标志物(如dna和rna)同时测量,并且需要大量样品。

2、邻位连接技术(proximity ligation assay,pla)是基于酶联机制和连接子(一种人工设计的线状寡核苷酸单链,其两端可以与特定靶序列互补。当连接子与靶序列杂交时,在空间上就会彼此靠近,探针的两个末端就可以在dna连接酶的作用下连接成链)而建立的一种高灵敏度的蛋白质体外分析技术。该方法首先利用一对邻位探针对靶分子进行双识别,产生可扩增的检测信号,再通过定量pcr实现定时定本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于邻位连接的用于检测低丰度生物标志物蛋白定量的单分子检测分析方法,其特征是,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的基于邻位连接的用于检测低丰度生物标志物蛋白定量的单分子检测分析方法,其特征在于,所述第六步是通过微流控芯片将PCR预混液分为众多微液滴;

3.根据权利要求2所述的基于邻位连接的用于检测低丰度生物标志物蛋白定量的单分子检测分析方法,其特征在于,所述第九步,将图像中的微液滴区分为阳性液滴和阴性液滴,然后根据阳性液滴和阴性液滴的数目计算出待测定分子的数量。

4.根据权利要求1或2所述的基于邻位连接的用于检测低丰度生物标志物蛋白定量的单...

【技术特征摘要】

1.一种基于邻位连接的用于检测低丰度生物标志物蛋白定量的单分子检测分析方法,其特征是,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的基于邻位连接的用于检测低丰度生物标志物蛋白定量的单分子检测分析方法,其特征在于,所述第六步是通过微流控芯片将pcr预混液分为众多微液滴;

3.根据权利要求2所述的基于邻位连接的用于检测低丰度生物标志物蛋白定量的单...

【专利技术属性】
技术研发人员:梁宇潘伦邹灵龙张贺峰
申请(专利权)人:国科温州研究院温州生物材料与工程研究所
类型:发明
国别省市:

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1