【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及疫苗效力测定，尤其涉及一种羊败血性链球菌灭活疫苗效力的检验方法与应用。
技术介绍
1、羊败血性链球菌病是由c群链球菌马链球菌兽疫亚种(streptococcus equisubspecies zooepidemicus，sez)引起的一种急性、热性、败血性传染病。羊通常于气候寒冷时出现发病，发病与气候变化相关，羊通常于冬春寒冷、多风、缺草季节时出现发病，10月份到翌年4月份为多发期。发病多为急性型，发病羊出现体温升高(大于41℃)、精神萎顿、食欲废绝、行动不便、眼部充血、咽喉肿胀，剖检可见胆囊肿大以及纤维素性肺炎。易引起魏氏梭菌、腐败梭菌、大肠杆菌等的继发感染致使病情加重。
2、目前疫苗免疫依然是防控羊败血性链球菌病的有效手段。通过稳定高效的检测方法确认羊败血性链球菌病疫苗是否安全有效，这对于防控该疫病意义重大。按照现行《中国兽药典》(2020版)规定，羊败血性链球菌病疫苗在进行效力检验时，应使用靶动物(羊)进行免疫攻毒验证疫苗效力。而使用靶动物进行检验存在动物健康状态不可控、筛选困难、操作繁琐、动物价格高、生物安全级别不恰当的饲养环境，运行维护成本较大等问题。
3、替代靶标动物羊验证疫苗效力的方法亟需解决。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种羊败血性链球菌灭活疫苗效力的检验方法与应用。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种羊败血性链球菌灭活疫苗效力的检验方法，
4、(1)利用羊败血性链球菌灭活疫苗免疫小鼠，饲养20～22d后，得到经过免疫的小鼠；
5、(2)利用羊败血性链球菌混合菌液对经过免疫的小鼠进行攻毒，观察小鼠的死亡情况，根据小鼠的死亡情况评价羊败血性链球菌灭活疫苗的效力；
6、所述羊败血性链球菌灭活疫苗为cvcc55001株灭活疫苗和/或cvcc55002株灭活疫苗；
7、所述羊败血性链球菌混合菌液包括cvcc55001菌液和cvcc55002菌液；所述cvcc55001菌液和cvcc55002菌液的体积比为1～2:1～2；
8、所述羊败血性链球菌混合菌液的活菌浓度为2倍最低致死量的活菌浓度。
9、优选的，所述羊败血性链球菌灭活疫苗为经过稀释的灭活疫苗；所述稀释的倍数为1～2倍。
10、优选的，所述羊败血性链球菌灭活疫苗免疫小鼠的免疫剂量为0.1～0.3ml/只。
11、优选的，所述小鼠为小鼠km。
12、优选的，所述最低致死量的活菌浓度为16cfu。
13、优选的，所述攻毒的剂量为0.1～0.3ml/只。
14、本专利技术还提供了所述的检验方法在评价羊败血性链球菌灭活疫苗的效力中的应用，利用该检验方法评价得到的羊败血性链球菌灭活疫苗的效力≥70％时为合格疫苗。
15、本专利技术还提供了所述的检验方法在替代羊作为评价羊败血性链球菌灭活疫苗的效力中的应用。
16、本专利技术提供了一种羊败血性链球菌灭活疫苗效力的检验方法与应用。本专利技术的方法具有如下优点：
17、本专利技术通过动物攻毒法为基础确定该疫苗的最小保护剂量，接着从目前常用作实验动物的三类稳定近交系小鼠：km小鼠、cd1-icr鼠以及balb/c小鼠中筛选适用于该菌攻毒的小鼠品系，在确定的小鼠品系上开展对应于最小保护剂量和不保护临界剂量(可理解为最大不保护剂量)的平行关系研究，确定在小鼠模型上最能够体现疫苗差异的攻毒剂量，最终确定实验动物免疫攻毒替代方案即为本专利技术的方案。本专利技术的方案经过验证得出，可以替代大型动物羊作为靶标动物验证疫苗效力时的不足。
18、本专利技术筛选得到作为小鼠免疫攻毒保护实验的攻毒剂量为32cfu(即2倍最低致死量的活菌浓度)评价疫苗效力。
19、羊败血性链球菌灭活疫苗效力检验需要使用羊进行免疫攻毒实验，除了较高的经济花费外，羊本身作为非标准实验动物，其健康状况及易感情况都需要额外的手段以评估，而评估过程中存在的困难包括动物来源的不稳定以及缺少可靠有效的筛选手段。小鼠作为实验室常用的实验动物，因其世代周期短、遗传背景明确、饲养环境清洁可控，保证了基于小鼠的检验方法具备良好的稳定性和可重复性。因此利用小鼠进行实验，该方案简单、可控、成本低，为后期羊败血性链球菌灭活疫苗效力检测的替代方法鉴定基础。
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1.一种羊败血性链球菌灭活疫苗效力的检验方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的检验方法，其特征在于，所述羊败血性链球菌灭活疫苗为经过稀释的灭活疫苗；所述稀释的倍数为1～2倍。
3.根据权利要求2所述的检验方法，其特征在于，所述羊败血性链球菌灭活疫苗免疫小鼠的免疫剂量为0.1～0.3mL/只。
4.根据权利要求3所述的检验方法，其特征在于，所述小鼠为小鼠KM。
5.根据权利要求4所述的检验方法，其特征在于，所述最低致死量的活菌浓度为16CFU。
6.根据权利要求5所述的检验方法，其特征在于，所述攻毒的剂量为0.1～0.3mL/只。
7.权利要求1～6任意一项所述的检验方法在评价羊败血性链球菌灭活疫苗的效力中的应用，其特征在于，利用该检验方法评价得到的羊败血性链球菌灭活疫苗的效力≥70％时为合格疫苗。
8.权利要求1～6任意一项所述的检验方法在替代羊作为评价羊败血性链球菌灭活疫苗的效力中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种羊败血性链球菌灭活疫苗效力的检验方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的检验方法，其特征在于，所述羊败血性链球菌灭活疫苗为经过稀释的灭活疫苗；所述稀释的倍数为1～2倍。
3.根据权利要求2所述的检验方法，其特征在于，所述羊败血性链球菌灭活疫苗免疫小鼠的免疫剂量为0.1～0.3ml/只。
4.根据权利要求3所述的检验方法，其特征在于，所述小鼠为小鼠km。
5.根据权利要求4所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：张一帜，任小侠，冯妍，李建，张媛，朱良全，刘燕，姚文生，马欣，赵浩然，
申请(专利权)人：中国兽医药品监察所，
类型：发明
国别省市：
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