药物缀合物组合物制造技术

本发明专利技术提供液体组合物和冻干组合物，该组合物包含治疗有效量的缀合物，该缀合物包含与类美坦素（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）化学偶联的抗体。本发明专利技术进一步提供杀死人体细胞的方法，包含对人体给予两种组合物之一，以便抗体与细胞表面结合，激活类美坦素的细胞毒性，由此杀死细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】药物缀合物组合物
本专利技术涉及包含与类美坦素(maytansinoid)化学偶联的抗体的缀合物和其使用方法。
技术介绍
随着更有效靶向和杀死癌细胞的药物的开发，癌症的治疗已经取得显著的进展。为此，研究人员利用被癌细胞选择性表达的细胞表面受体和抗原来开发基于结合肿瘤-特异性或肿瘤-相关性抗原的抗体的药物。在这一点上，已经使细胞毒性分子、例如细菌与植物毒素、放射性核素和某些化疗药物在化学上与结合肿瘤-特异性或肿瘤-相关性细胞表面抗原的单克隆抗体连接(例如参见国际(PCT)专利申请No.WO00/02587、WO 02/060955和WO 02/092127，美国专利5,475,092、6,340,701、6,171,586，美国专利申请公报No.2003/0004210 A1，和Ghetie等人，J.Immunol.Methods，112，267-277(1988))。这类化合物通常分别被称为毒素、放射性核素和药物“缀合物(conjugate)”。经常，它们也被称为免疫缀合物、放射性免疫缀合物和免疫毒素。肿瘤细胞的杀死发生在药物缀合物与肿瘤细胞的结合和类美坦素细胞毒性活性的活化之后。由药物缀合物所提供的选择性减少对正常细胞的毒性，由此增强药物在患者中的耐受性。尽管药物缀合物提供肿瘤选择性，不过药物缀合物在临床背景下的应用仍然受到一些因素的限制。在这方面，药物缀合物制剂通常基于抗体的已知制剂，从该制剂制造药物缀合物，而没有考虑所缀合的细胞毒性分子可能对抗体稳定性具有什么影响。因此，目前的药物缀合物组合物不如含有单独肿瘤-特异性抗体的组合物那么稳定。因而，鉴于上述，仍然需要含有高度细胞毒性药物的药物缀合物-->组合物，它们比目前可用的药物缀合物组合物更稳定。也仍然需要使用这类药物缀合物组合物治疗与细胞增殖有关的人类疾病、例如癌症的方法。本专利技术提供这样一种组合物和方法。本专利技术的这些和其他优点以及另外的专利技术特征将因本文所提供的专利技术说明而显而易见。
技术实现思路
本专利技术提供组合物，包含(i)治疗有效量的缀合物，包含与类美坦素化学偶联的抗体，(ii)缓冲剂，(iii)张力调节量(渗透压调节量，tonicifying amount)的氯化钠，(iv)水，和可选的(v)表面活性剂，其中该组合物具有约5-6的pH。本专利技术也提供冻干组合物，包含(i)治疗有效量的缀合物，包含与类美坦素化学偶联的抗体，(ii)缓冲剂，(iii)低温保护剂(冷冻保护剂，cryoprotectant)，(iv)填充剂，和可选的(v)表面活性剂，其中当用水重构时该组合物具有约5-6的pH。本专利技术进一步提供杀死人体细胞的方法，包含对人体给予两种上述组合物之一，以便抗体与细胞表面结合，激活类美坦素的细胞毒性，由此杀死细胞。专利技术的详细说明本专利技术提供组合物，包含(i)治疗有效量的缀合物，包含与类美坦素化学偶联的抗体，(ii)缓冲剂，(iii)张力调节量的氯化钠，(iv)水，和可选的(v)表面活性剂，其中该组合物具有约5-6的pH。本专利技术组合物含有缀合物，它包含与类美坦素化学偶联的抗体。本文所用的术语“抗体”表示任意免疫球蛋白，任意免疫球蛋白片段，例如Fab、F(ab′)2、dsFv、sFv、二体(diabodies)和三体(triabodies)，或免疫球蛋白嵌合体，它们能够与细胞表面上的抗原结合(例如含有互补性决定区(CDR))。在本专利技术组合物中可以使用任意适合的抗体。本领域普通技术人员将领会到，适当抗体的选择将依赖于所要靶向的细胞群。在这一点上，在特定细胞群(通常和优选为患病细胞群)中-->被选择性表达的细胞表面分子(即抗原)的类型和数量将支配适用于本专利技术组合物的抗体的选择。多种细胞类型的细胞表面表达方式都是已知的，包括肿瘤细胞类型，或者如果未知，可以利用常规分子生物学和组织化学技术来测定。抗体可以是单克隆的或多克隆的，但是最优选单克隆抗体。本文所用的“多克隆”抗体表示抗体的杂合群，通常包含在致免疫动物的血清中。“单克隆”抗体表示抗体分子的纯合群，它们是特定抗原特异性的。单克隆抗体通常是由B淋巴细胞(“B细胞”)的单一克隆体产生的。可以利用本领域技术人员已知的多种技术得到单克隆抗体，包括标准杂交瘤技术(例如参见Kohler and Milstein，Eur.J.Immunol.，5，511-519(1976)，Harlow and Lane(eds.)，Antibodies：A Laboratory Manual，CSH Press(1988)和C.A.Janeway等人(eds.)，Immunobiology，5th Ed.，Garland Publishing，New York，NY(2001))。简而言之，生产单克隆抗体的杂交瘤法通常牵涉向任意适合的动物、通常和优选为小鼠注射抗原(即“免疫原”)。随后处死动物，从其脾脏分离的B细胞与人骨髓瘤细胞融合。产生杂合细胞(即“杂交瘤”)，它无限地增殖，连续分泌具有所需体外特异性的高效价抗体。可以利用本领域已知的任意适当方法来鉴定产生具有所需特异性的抗体的杂交瘤细胞。这类方法例如包括酶联免疫吸附测定(ELISA)、蛋白质印迹(Western blot)分析和放射性免疫测定。筛选杂交瘤群，以分离单独的克隆体，它们各自分泌单一的抗体品种针对抗原。因为每种杂交瘤是从与单一B细胞融合衍生的克隆体，它产生的所有抗体分子在结构上都是相同的，包括它们的抗原结合位点和同种型。也可以利用其他适合的技术生成单克隆抗体，包括EBV-杂交瘤技术(例如参见Haskard和Archer，J.Immunol.Methods，74(2)，361-67(1984)和Roder等人，Methods Enzymol.，121，140-67(1986))，或者噬菌体载体表达系统(例如参见Huse等人，Science，246，1275-81(1989))。为了制备单克隆抗体片段，通常采用重组方法。-->单克隆抗体可以是从任意适合的动物中分离的或者是在任意适合的动物中产生的，但是优选地是在哺乳动物中产生的，更优选小鼠，最优选人。在小鼠中产生抗体的方法是本领域技术人员熟知的，本文有所描述。关于人抗体，本领域普通技术人员将领会到，可以从用适当抗原接种疫苗或者致免疫的人类受试者血清中分离多克隆抗体。或者可以通过采用在非人类动物、例如小鼠中产生人抗体的已知技术，生成人抗体(例如参见美国专利5,545,806、5,569,825和5,714,352，和美国专利申请公报No.2002/0197266 A1)。尽管是人类治疗性应用的理想选择，人抗体、特别是人单克隆抗体通常比小鼠单克隆抗体更加难以生成。不过，当对人类给药时小鼠单克隆抗体诱导迅速的宿主抗体应答，这会降低抗体-药物缀合物的治疗或诊断潜力。为了回避这些复杂情况，单克隆抗体优选地不被人免疫系统识别为“外来物”。为此，可以利用噬菌体展示生成抗体。在这一点上，可以利用标准分子生物学和重组DNA技术生成编码抗体的抗原-结合性可变(V)结构域的噬菌体文库(例如参见Sambrook等人(eds.)，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，3d Edition，Co本文档来自技高网...

【技术保护点】
组合物，包含（ｉ）治疗有效量的缀合物，该缀合物包含与类美坦素化学偶联的抗体，（ｉｉ）缓冲剂，（ｉｉｉ）表面活性剂，（ｉｖ）张力调节量的氯化钠，和（ｖ）水，其中该组合物具有约５－６的ｐＨ。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2003-5-14 60/470,5501、组合物，包含(i)治疗有效量的缀合物，该缀合物包含与类美坦素化学偶联的抗体，(ii)缓冲剂，(iii)表面活性剂，(iv)张力调节量的氯化钠，和(v)水，其中该组合物具有约5-6的pH。2、权利要求1的组合物，其中该缀合物在组合物中的浓度是约0.1mg/mL至约5mg/mL。3、权利要求2的组合物，其中该缀合物在组合物中的浓度是约1mg/mL或以上。4、权利要求2的组合物，其中该缀合物在组合物中的浓度是约5mg/mL。5、权利要求1-4任一项的组合物，其中该缓冲剂选自由柠檬酸盐缓冲剂、乙酸盐缓冲剂、琥珀酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂和组氨酸缓冲剂组成的组。6、权利要求5的组合物，其中该缓冲剂在组合物中的浓度是约2mM至约50mM。7、权利要求6的组合物，其中该组合物包含浓度约10mM的柠檬酸钠缓冲剂，该组合物的pH是约5.5。8、权利要求1-7任一项的组合物，其中该表面活性剂是聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。9、权利要求8的组合物，其中该表面活性剂在组合物中的浓度占-->组合物总体积的约0.002％至约0.1％。10、权利要求9的组合物，其中该表面活性剂是聚山梨醇酯20。11、权利要求10的组合物，其中聚山梨醇酯20在组合物中的浓度占组合物总体积的约0.01％。12、权利要求1-11任一项的组合物，其中氯化钠在组合物中的浓度是约50mM至约500mM。13、权利要求12的组合物，其中氯化钠在组合物中的浓度是约100mM至约200mM。14、权利要求13的组合物，其中氯化钠在组合物中的浓度是约120mM。15、权利要求1的组合物，其中该组合物包含(i)约5mg/mL缀合物，包含与DM1化学偶联的huN901，(ii)约10mM柠檬酸钠缓冲剂，(iii)约0.01％聚山梨醇酯20，(iv)约120mM氯化钠，和(v)水，其中组合物的pH是约5.5。16、权利要求1的组合物，其中该组合物包含(i)约1mg/mL或以上缀合物，包含与DM1化学偶联的huMy9-6，(ii)约10mM柠檬酸钠缓冲剂，(iii)约0.01％聚山梨醇酯20，(iv)约135mM氯化钠，和(v)水，其中组合物的pH是约5.5。17、权利要求1的组合物，其中该组合物包含(i)约1mg/mL或以上缀合物，包含与DM4化学偶联的huMy9-6，(ii)约10mM柠檬酸钠缓冲剂，(iii)约0.01％聚山梨醇酯20，(iv)约135mM氯化钠，和(v)水，其-->中组合物的pH是约5.5。18、权利要求1-17任一项的组合物，其中该组合物进一步包含抗氧化剂。19、权利要求18的组合物，其中该抗氧化剂在组合物中的浓度是约100μM至约100mM。20、权利要求19的组合物，其中该抗氧化剂选自由超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、生育三烯酚、多元酚、锌、锰、硒、维生素C、维生素E、β胡萝卜素、半胱氨酸和甲硫氨酸组成的组。21、权利要求20的组合物，其中该抗氧化剂是甲硫氨酸。22、权利要求21的组合物，其中甲硫氨酸在组合物中的浓度是约10mM。23、权利要求1-22任一项的组合物，其中该组合物包含蔗糖。24、权利要求23的组合物，其中蔗糖在组合物中的浓度占组合物总体积的约0.1％至约10％。25、权利要求24的组合物，其中蔗糖在组合物中的浓度占组合物总体积的约5％。26、带包装的组合物，包含密封的容器和分散其中的权利要求1-26任一项的组合物和惰性气体覆盖层。27、权利要求26的带包装的组合物，其中该惰性气体是氮或氩。-->28、杀死人体细胞的方法，包含对人体给予一种组合物，该组合物包含(i)治疗有效量的缀合物，该缀合物包含与类美坦素化学偶联的抗体，(ii)缓冲剂，(iii)表面活性剂，(iv)张力调节量的氯化钠，和(v)水，其中该组合物具有约5-6的pH，以便抗体与细胞表面结合，激活类美坦素的细胞毒性，由此杀死细胞。29、权利要求28的方法，其中该缀合物在组合物中的浓度是约0.1mg/mL至约5mg/mL。30、权利要求29的方法，其中该缀合物在组合物中的浓度是约1mg/mL或以上。31、权利要求29的方法，其中该缀合物在组合物中的浓度是约5mg/mL。32、权利要求28-31任一项的方法，其中该表面活性剂是聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。33、权利要求29的方法，其中该表面活性剂是聚山梨醇酯20。34、权利要求28-33任一项的方法，其中该组合物进一步包含抗氧化剂。35、权利要求34的方法，其中该抗氧化剂选自由超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、生育三烯酚、多元酚、锌、锰、硒、维生素C、维生素E、β胡萝卜素、半胱氨酸和甲硫氨酸组成的组。36、权利要求35的方法，其中该抗氧化剂是甲硫氨酸。-->37、权利要求28-36任一项的方法，其中该组合物包含蔗糖。38、冻干组合物，包含(i)治疗有效量的缀合物，该缀合物包含与类美坦素化学偶联的抗体，(ii)缓冲剂，(iii)表面活性剂，(iv)低温保护剂，和(v)填充剂，其中当用水重构时该组合物具有约5-6的pH。39、权利要求1-14任一项或权利要求38的组合物，其中该抗体是单克隆抗体。40、权利要求39的组合物，其中该抗体是人源化单克隆抗体。41、权利要求39的组合物，其中该抗体选自由huN901、huMy9-6、huB4、huC242、trastuzumab、bivatuzumab、sibrotuzumab和rituximab组成的组。42、权利要求1-14任一项或权利要求38-41任一项的组合物，其中该类美坦素包含硫醇基团。43、权利要求42的组合物，其中该类美坦素是DM1。44、权利要求42的组合物，其中该类美坦素是DM4。45、权利要求1-14任一项或权利要求38-44任一项的组合物，其中该抗体与类美坦素经由化学键化学偶联，该化学键选自由二硫键、酸不稳定键、光不稳定键、肽酶不稳定键、硫醚键和酯酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：G安普莱特，W张，M弗莱明，HW秦，
申请(专利权)人：免疫原公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]