一种大豆CRISPR/Cas9基因编辑载体及基因编辑方法技术

本发明专利技术公开了一种大豆CRISPR/Cas9基因编辑载体及基因编辑方法，涉及植物分子生物学领域，其技术方案要点是：包括设计两个sgRNA，并利用CRISPR/CAS9基因编辑技术通过同时编辑GmBADH1和GmBADH2基因，构建了两个单基因编辑载体和一个双基因编辑载体，成功获得了3个GmBADH1单基因编辑株系、3个GmBADH2单基因编辑株系以及3个双基因编辑株系，获得了具有芳香表型的基因编辑突变体，创制了四种新的功能等位基因。本发明专利技术可以实现对大豆中目标基因的精确编辑，最小化对非靶基因的影响，提高编辑效率和准确性，并为香味育种提供遗传材料。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物分子生物学领域，更具体地说，它涉及一种大豆crispr/cas9基因编辑载体及基因编辑方法。

技术介绍

1、大豆富含丰富的营养物质，素有“植物肉”的美称，其副加工产品如毛豆、豆腐、豆浆、大豆油、异黄酮、豆粕等是人类以及畜牧业植物蛋白的重要来源，因此大豆也被称为是二十一世纪最健康的食物之一，目前大豆已经成为人们膳食结构中不可或缺的一部分。

2、对于作物来说，基因工程技术最重要的应用之一是快速有效的改良和创造新品种，传统的基因工程育种技术可以通过外源dna整合到植物基因组中，进而实现基因沉默或过表达，从而实现对植物性状的定向改良。但由于大豆是一种转化效率较低的作物，因此利用传统的转基因技术往往无法克服基因敲除不完整，外源基因随机插入等缺陷，对于转基因大豆的育种工作，crispr/cas9系统相对稳健，可实现目标性状的精准改良，从而获得具有特定优异性状的育种资源，并且所创制的新品种与传统育种技术所获得的品种无差异。

3、为了解决上述问题，中国专利(专利公告号：cn104450774a)公布了一种大豆crispr/cas9本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种大豆CRISPR/Cas9基因编辑载体，其特征是：所述载体以pBSE401质粒为骨架载体，还包括依次连接的大豆内源U6启动子、sgRNA和大豆偏好密码子优化的Cas9蛋白的编码基因zCas9；

2.根据权利要求1所述的一种大豆CRISPR/Cas9基因编辑载体，其特征是：所述载体包括GmBADH1单敲载体pGmBADH1-g6、GmBADH2单敲载体pGmBADH2-g1、两基因双敲载体pGmBADHⅠ-BADHⅡ。

3.一种基于权利要求1所述大豆CRISPR/Cas9基因编辑载体的基因编辑方法，其特征是：所述基因编辑方法具体为：>

4.一种基于...

【技术特征摘要】

1.一种大豆crispr/cas9基因编辑载体，其特征是：所述载体以pbse401质粒为骨架载体，还包括依次连接的大豆内源u6启动子、sgrna和大豆偏好密码子优化的cas9蛋白的编码基因zcas9；

2.根据权利要求1所述的一种大豆crispr/cas9基因编辑载体，其特征是：所述载体包括gmbadh1单敲载体pgmbadh1-g6、gmbadh2单敲载体pgmbadh2-g1、两基因双敲载体pgmbadhⅰ-badhⅱ。

3.一种基于权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱丽娟，石宇欣，张永芳，李晓菲，
申请(专利权)人：中国农业科学院作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：