公开了Ｌ－肉碱和烷酰基Ｌ－肉碱的酯，它们可以作为阳离子脂质用于细胞内释放药理学的活性化合物。也公开了具有式（Ⅱ）结构的Ｌ－肉碱和烷酰基Ｌ－肉碱的新酯，其中Ｒ基团的定义如说明书所述。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
用于胞内释放药理活性化合物的用作阳离子脂质的L-肉碱或烷酰基L-肉碱的酯本专利技术是2000年4月11日递交的申请号为00807053.9(PCT/IT00/00137)、专利技术名称为“用于胞内释放药理活性化合物的用作阳离子脂质的L-肉碱或烷酰基L-肉碱的酯”的中国专利申请的分案申请。
本专利技术涉及一类新的L-肉碱和酰基L-肉碱的酯以及它们作为适于帮助药理活性化合物的胞内释放、促进它们的跨膜转运或促进它们与特定细胞膜位点(受体)的相互作用的阳离子脂质的用途。本专利技术还涉及作为上述新化合物用于相同目的的L-肉碱和酰基L-肉碱的其他已知酯。术语“胞内释放”在本文中的意思是指用天然来源或经过修饰赋予了治疗活性的多核苷酸或质粒进行细胞转染(基因释放)，或者将药物或免疫原性肽掺入到细胞中。
技术介绍
许多药理活性物质，诸如象多肽和蛋白质或药物一般需要穿透到细胞中通过以亚细胞或分子水平影响细胞功能而发挥它们的作用。对于这些分子来说，细胞膜构成了选择性不透屏障。细胞膜事实上履行保护功能，阻止可能的毒性物质进入，但也阻止了具有治疗活性的化合物通过。细胞膜的复合组成包括磷脂、糖脂和蛋白质；其功能受到细胞浆组分如Ca++及其他离子、ATP、微丝、微管、酶和、与Ca++键合的蛋白质的影响。不同的细胞类型显示的选择性和它们之间的选择性是由于细胞的结构和细胞浆组分之间的相互作用和对外界信号的反应造成的。通过将复合物中的物质与再现天然来源的膜脂质组分的脂质制剂结合可以克服细胞膜的屏障效应。这些脂质可以与膜融合并释放与其结合的物质使之进入细胞。这些脂质复合物不仅能通过与膜融合的方式促进细胞内的转移，也能降低细胞膜与欲穿透细胞膜进入细胞的分子之间的电荷排斥力。两性脂质，如膜磷脂，在水性系统中形成脂质小囊或脂质体。脂质体是一种小囊，其中水性体积被一或多层由脂质分子-通常为磷脂-组成的膜完全包裹。磷脂有一个亲水的头和一对碳链(疏-->水性的尾)，它是生物膜的主要组分。在水溶液中，疏水性的尾自动排斥水，而此时亲水性头与介质相互作用，自然形成有不同直径的小囊的群体。脂质体一般是两性离子，中性或阴离子。这些小囊可以作为药物、小分子、蛋白质、核苷酸和质粒的载体。近年来，已广泛使用阳离子脂质体向细胞中转移遗传物质，它是一类由合成脂质制备的带正电荷的小囊。DNA的阴性电荷可以与阳离子脂质体相互作用，形成稳定的DNA-脂质体复合物。此技术的简单性和通用性使脂质体成为一种在人的基因疗法中输送基因的重要的载体。现在，用于基因疗法和NIH重组顾问委员会(NIHRecombinant Advisory Committee)批准的多数载体包括病毒的和合成的系统。病毒感染包括一系列复杂的机制以能够感染特定的细胞并携带DNA进入细胞核。基因疗法使用病毒载体的原理基于用对疗效编码的基因替换病毒基因，而不消除病毒颗粒感染细胞的能力。病毒疗法受到免疫、细胞病变和基因重组等病毒因素(viral elements)的限制。非常希望在病毒疗法中使用阳离子脂质。这些载体与生物来源的相比具有非常大的潜力，因为它们更安全、低毒并能够结合大体积的基因。然而，与生物载体相比，它们的细胞内基因转录产率较低。需牢记的是，这种转染体系的应用是在研究的初级阶段。阳离子脂质在DNA-脂质复合物的形成、细胞与复合物的相互作用、与细胞膜的融合、在细胞内释放DNA和转录等过程中起非常重要的作用。脂质体的体内(in-vivo)应用有重要的例子。病毒疗法的第一个临床试验是通过引入一个含有人脂质体复合的HLA-B7基因表达载体用于治疗黑素瘤。另一个重要的应用涉及脂质体复合的表达载体SV40C-FTR通过经肺途径或鼻腔喷雾给药治疗肺泡纤维变性。其他包括在癌症的基因疗法中使用脂质体的临床试验正在进展中。在阳离子脂质的结构中通常鉴别四个构成因素：带正电的阳离子头，间隔区，锚状脂质(the anchor lipid)和连接键。-->阳离子头导致阳离子脂质体和DNA之间、DNA-脂质体复合物和细胞膜及细胞的其他组分之间的相互作用。它含有一个或多个可以被取代的阳离子基团(决定于电荷数目)。间隔区是分子中分隔阳离子头和疏水性尾的部分，并且它确保阳离子头与DNA磷脂的阴离子电荷之间的最佳的接触。锚状脂质是分子的非极性烃部分，并决定双脂质层的物理性质，如其刚性和与膜脂质的交换速率。″连接键″表示烃链和分子的其他部分之间的键。此键决定了阳离子脂质的化学稳定性和生物降解能力。近年来脂质体在化妆品领域的应用稳定增长。脂质体在此领域的成功是由于皮肤对这些化合物是非常耐受的。它们既作为活性成分的载体，也作为促进活性成分吸收的化合物。在制备和使用脂质体方面的科技和专利参考文献是非常丰富的，然而仅有少量的参考文献记载了肉碱衍生物在基因释放中的应用，对于药物的传递，没有涉及制备即使极少地相似于本专利技术的化合物的已知技术的文献可供利用。专利申请EP 0 279 887记载了肉碱载体的应用，如磷脂酰基肉碱，可选地与其他磷脂和脂质(胆固醇、磷脂酰基胆碱、磷脂酰基丝氨酸)组成混合物，制备脂质体。在关于制备脂质体的例子中，与普萘洛尔结合制备了磷脂酰基肉碱脂质体，普萘洛尔是一种已知具有抗高血压、抗心绞痛和抗心律失常活性的药物。此处使用肉碱衍生物是基于肉碱显著的心肌向性。此向性使脂质体能避免被肝代谢而不能到达所需的靶部位。磷脂酰基肉碱的存在也使脂质体能够口服，因为它能对抗肠内的脂酶。在《医药化学杂志》1998，6月18日；41(13)：2207-15记载了一些用于基因释放的L-肉碱的酯，但并未记载或提示它们作为药物释放的有用药剂。WO96/39193记载了新的靶药物制剂，其目的在于通过肉碱-酰基肉碱移位酶系统进入线粒体，但未提示它们是制备脂质体的有用药剂。EP 559 625 B1记载了一些有选择性的胃肠道肌松弛活性的L--->肉碱和酰基L-肉碱的酯。近年来分子生物学家已鉴定了一些导致人类遗传疾病的染色体水平的缺损。现代医学的一个重要方面涉及用基因疗法方案治疗由遗传基因导致的疾病。如已提及的，阳离子脂质体广泛用于在细胞内传递药物活性化合物，促进跨膜输送或促进其与特定的细胞膜位点(受体)的相互作用。这些载体与源于生物的载体相比具有非常大的潜力，因为它们更安全、低毒并且也能结合大体积的基因。然而，与生物载体相比，它们的细胞内基因转录产率较低。此外，由常规的阳离子脂质介导的基因转移需要质粒DNA和阳离子脂质保持分离，恰在基因转移之前使其混合。使多核苷酸复合物稳定的尝试迄今为止是失败的，未能产生令人鼓舞的结果；实际上，它们仅在短的时间内保持稳定。在基因疗法或基因释放和药物释放领域，已认识到非常需要稳定、可再生的位点-特异性系统，它在一个适当的时间周期后也具有活性。已发现在促进细胞内的药理学活性化合物在细胞内传送方面具有强大活性的一类阳离子脂质含有新的L-肉碱和酰基L-肉碱的酯。这些新化合物是稳定和高选择性的，因为它们在到达靶器官时具有位点特异性。此特性使它们能特别有效地将活性物质直接传递到活性物质可以发挥其药理学活性的部位。
技术实现思路
此处记载的本专利技术的化合物是有通式(I)的化合物：-->其中：n是1-3的整数；R是氢或直链或分支的、有2-6个碳原子的本文档来自技高网...
【技术保护点】
含有式（Ⅱ）化合物的脂质体的用途，用于输送药物或有化妆品活性的物质， ＊＊＊ （Ⅱ） 其中 Ｒ↓［３］是饱和或不饱和，直线或分支，有４－２６个碳原子的酰基链； Ｒ↓［４］是饱和或不饱和，直线或分支，有４－２６个碳原子的烷基链；并且 Ｘ↑［－］是药理学可接受的酸的阴离子。
【技术特征摘要】
IT 1999-4-13 RM99A0002201.含有式(II)化合物的脂质体的用途，用于输送药物或有化妆品活性的物质，其中R3是饱和或不饱和，直线或分支，有4-26个碳原子的酰基链；R4是饱和或不饱和，直线或分支，有4-26个碳原子的烷基链；并且X-是药理学可接受的酸的阴离子。2.根据权利要求1所述的用途，其中R3优选壬酰基、十二烷酰基、肉豆蔻酰基、棕榈酰基、硬脂酰基或油酰基。3.根据权利要求1所述的用途，其中R4优选壬烷基、十一烷基、十四烷基、十六烷基或油基。4.根据权利要求2所述的用途，其中X-选自：氯、溴、碘、门冬氨酸根、酸式门冬氨酸根、柠檬酸根、酸式柠檬酸根、酒石酸根、酸式酒石酸根、磷酸根、酸式磷酸根、延胡索酸根、酸式延胡索酸根、甘油磷酸根、葡萄糖磷酸根、乳酸根、顺丁烯二酸根、酸式顺丁烯二酸根、粘酸根、乳清酸根、草酸根、酸式草酸根、硫酸根、酸式硫酸根、三氯醋酸根、三氟醋酸根、甲磺酸根、双羟萘酸根和酸式双羟萘酸根。5.根据权利要求1-4任一项的用途，其中的化合物选自：-棕榈酰基L-肉碱氯化物十一烷基酯；-硬脂酰基L-肉碱氯化物十一烷基酯；-硬脂酰基L-肉碱氯化物十四烷基酯；-->-棕榈酰基L-肉碱氯化...
【专利技术属性】
技术研发人员：C匹萨诺，MO廷提，M圣塔尼罗，L克里泰利，G萨尔瓦托利，
申请(专利权)人：希格马托制药工业公司，
类型：发明
国别省市：IT[意大利]
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