一种MMLV逆转录酶突变体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种MMLV逆转录酶突变体及其应用，所述MMLV逆转录酶突变体在如SEQ ID NO:1所示的野生型MMLV逆转录酶氨基酸序列基础上进行氨基酸位点的突变；所述氨基酸突变的位点包括M39L、Q68L、Q68R、L72K、L72I、I74L、Q84L、F155N、C157H、I179T、D200N、D200H、V223I、M289L、C310Q、T330G、T330S、T330P、L435R、L435P、L435K、L435M、V475E、L478I、D524A和D583N中的一种或多种。本发明专利技术制备得到的MMLV逆转录酶突变体，相对于野生型，兼具产量高、热稳定高、灵敏度高的优势。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种mmlv逆转录酶突变体及其应用。

技术介绍

1、逆转录酶来源于含rna的逆转录病毒，具有三种酶活性的多功能酶，包括rna和dna依赖性的dna聚合活性，以及催化rna-dna杂合链中rna裂解的rnase h活性，可以聚合dntp合成cdna链，是现代生物技术和分子诊断的标准工具，被广泛用于许多研究应用中，包括cdna克隆，逆转录酶-pcr定量，微阵列分析，race等。

2、目前，市面上最常用的逆转录酶是来自moloney鼠白血病病毒的mmlv逆转录酶。mmlv逆转录酶是一种单亚基酶，分子量为71kda，长度为671aa，在mn2+存在下比mg2+更活跃。野生型mmlv逆转录酶最佳工作温度为37–42℃，在进行逆转录过程中，遇到具有复杂的二级结构rna模板，会暂停逆转录过程，导致反应产物截短。当逆转录反应温度从37℃升高到55℃时，复杂的rna模板的二级结构的氢键打开，变成线性单链rna，使得逆转录反应继续进行。但野生型mmlv逆转录酶在55℃时，稳定性下降，从而逆转录活性下降，因此亟需热稳定性以及扩增效率更优的本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种MMLV逆转录酶突变体，其特征在于，其在如SEQ ID NO:1所示的野生型MMLV逆转录酶氨基酸序列基础上进行氨基酸位点的突变；所述突变的位点包括M39L、Q68L、Q68R、L72K、L72I、I74L、Q84L、F155N、C157H、I179T、D200N、D200H、V223I、M289L、C310Q、T330G、T330S、T330P、L435R、L435P、L435K、L435M、V475E、L478I、D524A和D583N中的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的MMLV逆转录酶突变体，其特征在于，所述MMLV逆转录酶突变体包含如SEQ ID NO:...

【技术特征摘要】

1.一种mmlv逆转录酶突变体，其特征在于，其在如seq id no:1所示的野生型mmlv逆转录酶氨基酸序列基础上进行氨基酸位点的突变；所述突变的位点包括m39l、q68l、q68r、l72k、l72i、i74l、q84l、f155n、c157h、i179t、d200n、d200h、v223i、m289l、c310q、t330g、t330s、t330p、l435r、l435p、l435k、l435m、v475e、l478i、d524a和d583n中的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的mmlv逆转录酶突变体，其特征在于，所述mmlv逆转录酶突变体包含如seq id no:2-11任一所示的氨基酸序列。

3.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码如权利要求1-2任一项所述的mmlv逆转录酶突变体。

4.与权利要求3所述的核酸分子相关的生物材料，其特征在于，所述生物材料包含a1)～a7)中至少一种：

5.权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱益波，瞿芳，陶颖，胡莉琴，周启政，张慧，
申请(专利权)人：湖南艾科瑞生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：