【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及疫苗，特别是涉及疫苗注射剂及其制备方法。
技术介绍
1、铝胶佐剂是一种乳白色的凝胶半固体，包括氢氧化铝凝胶等，其通过吸附蛋白质抗原形成抗原集合体，在体内缓慢的释放出抗原，从而可以延长抗原的作用时间，被广泛应用于各类疫苗中。免疫增强剂是一类可以提高机体免疫应答的物质，将疫苗与免疫增强剂联合使用可以进一步提高疫苗的效果。然而，疫苗和免疫增强剂在人体内的运输和代谢过程存在差异，导致疫苗与免疫增强剂在体内不同区域和不同时间不能维持较合适的浓度比例，使得免疫效果无法进一步得到提高。
2、通过对疫苗注射剂制备方法的改进，有助于进一步提高疫苗对人体的免疫作用。
技术实现思路
1、基于此，有必要提供一种疫苗注射剂及其制备方法。
2、一种疫苗注射剂的制备方法，包括如下步骤：
3、提供呈胶体状且铝离子含量在0.3～1.5mg/ml的铝胶佐剂分散液、灭活菌液和免疫增强剂，混合后，分离胶质沉淀；
4、将所述胶质沉淀与注射溶剂混合，得到所述疫苗注射剂。
5、本方案通过铝胶佐剂将灭火菌液和免疫增强剂一同吸附形成胶质沉淀，并且将胶质沉淀分离后与注射溶剂混合，形成疫苗注射剂，从而保证疫苗注射剂中没有游离的灭活菌液(即抗原)和免疫增强剂，待疫苗注射剂注入体内后，由铝胶佐剂的缓释作用持续释放抗原和免疫增强剂，使得抗原和免疫增强剂的浓度由0开始逐渐增加到趋近于平衡，抗原和免疫增强剂随着铝胶佐剂的运输而在体内各区域缓释，如此可以保证抗原和免疫增强剂
6、具体地，所述注射溶剂包括水、生理盐水或磷酸盐缓冲液中的至少一种。这些液体能够作为胶质沉淀的稀释剂，使得胶质沉淀富有流动性，且适配于受体体内状况。
7、在其中一个实施例中，所述呈胶体状且铝离子含量在0.3～1.5mg/ml的铝胶佐剂分散液的制备方法包括：取铝盐溶液，在搅拌过程中逐渐加入水溶性碱，分离铝胶佐剂并加入去离子水，以制得呈胶体状且铝离子含量在0.3～1.5mg/ml的铝胶佐剂分散液。通过该步骤能够制得呈胶体状的铝胶佐剂分散液，且呈胶状的铝胶佐剂能够很好地吸收灭活菌液和免疫增强剂，从而将灭活菌液和免疫增强剂固定在铝胶佐剂的颗粒中，起到同步缓释的作用，并提升受体的免疫能力。
8、在其中一个实施例中，所述水溶性碱为氢氧化钠和氨水中的一种，该两种水溶性碱较常用于制备铝胶佐剂，从而制得纯度较高且更安全的铝胶佐剂。
9、在其中一个实施例中，将灭活菌液和免疫增强剂加入至所述铝胶佐剂分散液中的步骤之前还包括：
10、菌液制备步骤：将冻干菌株在clba血平板中培养复苏后，挑选单个菌落细菌接种于第一lb培养基，振荡培养，纯度检验合格后得到第一代菌种；挑取所述第一代菌种中的单个菌落接种到第一clba培养基继续培养，纯度检验合格后得到第二代菌种；挑取所述第二代菌种中的单个菌落，在第二lb培养基中培养，纯度检验合格后，按1％接种至新的第三lb培养皿中，振荡培养，纯度检验合格后进行下一步；具体地，将冻干菌株在clba血平板中培养复苏后，挑选单个菌落细菌接种于第一lb培养基，于35～40℃振荡培养16～24h，纯度检验合格后得到第一代菌种；挑取所述第一代菌种中的单个菌落接种到第一clba培养基继续培养，纯度检验合格后得到第二代菌种；挑取所述第二代菌种中的单个菌落，在第二lb培养基中培养，纯度检验合格后，按1％接种至第三lb培养皿中，于35～40℃振荡培养18～24h，纯度检验合格后进行下一步；
11、灭活步骤：加入甲醛溶液后密闭处理，取样接种第二clba培养基进行无菌检验，检验合格后进行下一步；具体地，加入甲醛溶液至终浓度为0.1～0.3％，在35～40℃温度下密闭处理16～32h，隔4～6h振摇一次，取样接种第二clba培养基进行无菌检验，检验合格后进行下一步；
12、菌液浓缩步骤：将菌液置于离心机离心，得到的菌泥洗涤至少三次后悬浮为菌液，调整所述菌液的浓度至1×109～3×109cfu/ml，得到灭活菌液；具体地，将菌液置于2000～4000rpm的离心机离心10～30min，得到的菌泥洗涤至少三次后悬浮为菌液，调整所述菌液的浓度至1×109～3×109cfu/ml，得到灭活菌液。
13、通过上述的制备步骤能够制得灭活菌液的纯度较高，适用于注射至受体体内，起到免疫作用。
14、在其中一个实施例中，所述铝胶佐剂包括氢氧化铝和磷酸铝中的至少一种，上述的氢氧化铝和磷酸铝均能很好地起到吸附灭活菌液和免疫增强剂的作用，且相对无毒，能够增加受体的免疫能力。具体地，所述氢氧化铝的粒径为2～20nm，磷酸铝的粒径为50～100nm。这个粒径范围能够较好地制得胶状的铝胶佐剂。
15、一种疫苗注射剂，采用如上述任一实施例中所述的疫苗注射剂制备方法制备得到。
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1.一种疫苗注射剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的疫苗注射剂的制备方法，其特征在于，所述呈胶体状且铝离子含量在0.3～1.5mg/ml的铝胶佐剂分散液的制备方法包括：取铝盐溶液，在搅拌过程中逐渐加入水溶性碱，分离铝胶佐剂并加入去离子水，以制得呈胶体状且铝离子含量在0.3～1.5mg/ml的铝胶佐剂分散液。
3.根据权利要求1所述的疫苗注射剂的制备方法，其特征在于，所述注射溶剂包括水、生理盐水或磷酸盐缓冲液中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的疫苗注射剂的制备方法，其特征在于，所述灭活菌液来源于人病原菌或兽病原菌。
5.根据权利要求4所述的疫苗注射剂的制备方法，其特征在于，所述人病原菌包含肺炎链球菌、结核杆菌。
6.根据权利要求1所述的疫苗注射剂的制备方法，其特征在于，所述灭活菌液的制备步骤包括：
7.根据权利要求6所述的疫苗注射剂的制备方法，其特征在于，所述菌液制备步骤包括：将冻干菌株在CLBA血平板中培养复苏后，挑选单个菌落细菌接种于第一LB培养基，于35～40℃振荡培养1
8.根据权利要求6所述的疫苗注射剂的制备方法，其特征在于，所述灭活步骤包括：在35～40℃温度下密闭处理16～32h，隔4～6h振摇一次，取样接种第二CLBA培养基进行无菌检验，检验合格后进行下一步。
9.根据权利要求6所述的疫苗注射剂的制备方法，其特征在于，所述菌液浓缩步骤包括：将菌液置于2000～4000rpm的离心机离心10～30min，得到的菌泥洗涤至少三次后悬浮为菌液，调整所述菌液的浓度至1×109～3×109CFU/ml。
10.一种疫苗注射剂，其特征在于，采用如权利要求1-9中任一项所述的疫苗注射剂的制备方法制备得到。
...【技术特征摘要】
1.一种疫苗注射剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的疫苗注射剂的制备方法，其特征在于，所述呈胶体状且铝离子含量在0.3～1.5mg/ml的铝胶佐剂分散液的制备方法包括：取铝盐溶液，在搅拌过程中逐渐加入水溶性碱，分离铝胶佐剂并加入去离子水，以制得呈胶体状且铝离子含量在0.3～1.5mg/ml的铝胶佐剂分散液。
3.根据权利要求1所述的疫苗注射剂的制备方法，其特征在于，所述注射溶剂包括水、生理盐水或磷酸盐缓冲液中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的疫苗注射剂的制备方法，其特征在于，所述灭活菌液来源于人病原菌或兽病原菌。
5.根据权利要求4所述的疫苗注射剂的制备方法，其特征在于，所述人病原菌包含肺炎链球菌、结核杆菌。
6.根据权利要求1所述的疫苗注射剂的制备方法，其特征在于，所述灭活菌液的制备步骤包括：
7.根据权利要求6所述的疫苗注射剂的制备方法，其特征在于，所述菌液制备步骤包括：将冻干菌株在clba血平板中培养复苏后，挑选...
【专利技术属性】
技术研发人员：方丽华，宁洁，吴朝文，方小康，黎清现，魏洪发，谢小红，
申请(专利权)人：深圳市龙华区中心医院，
类型：发明
国别省市：
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