【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物医药，特别涉及一种rsv pre-f截短体及其生产方法和应用。
技术介绍
1、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，简称rsv)是引起婴幼儿和老年人呼吸道感染的主要病毒之一，也是造成儿童下呼吸道感染死亡的主要原因之一。rsv属单股负链包膜rna病毒，为副粘病毒科，肺炎病毒属。rsv的包膜表面包含三种蛋白：g蛋白、f蛋白和sh蛋白。g蛋白主要负责病毒对宿主细胞的附着，f蛋白主要介导病毒对宿主细胞的融合与进入，而sh蛋白不参与以上两个过程。
2、f蛋白相对保守，常被用作疫苗抗原设计。介导病毒与宿主细胞膜融合的f蛋白以融合前(pre-fusion)与融合后(post fusion)两种形式存在。亚稳态的pre-f蛋白可通过构象改变介导膜融合，形成稳定的融合后f蛋白。通过对rsv f蛋白的结构及其诱导产生的中和抗体进行分析比较发现，f蛋白表面主要存在ⅰ、ⅱ、ⅲ、ⅳ、ⅴ六种不同的抗原表位。临床最早用于治疗rsv感染所引起的呼吸道疾病的治疗性单抗(帕利珠单抗，palivizumab)，是ⅱ号位点的特异性抗体。而表位和ⅴ表位是pre-f蛋白的特有表位，研究发现针对位点的特异性抗体拥有更好的中和活性。
3、目前rsv f蛋白构建的主要策略是通过二硫键和空腔填充将f蛋白稳定至融合前构象，为后续rsv疫苗研发提供了新的思路。在此基础上，通过不同策略稳定f蛋白从而进一步优化ds-cav1结构，获得较为稳定的pre-f蛋白结构。稳定的pre-f蛋白结构有利于在免疫后诱导产生更高水平
4、然后，rsv f蛋白的构建面临如下技术难题：完整的rsv f蛋白结构相对复杂，通过结构设计使f蛋白维持融合前构象的不确定因素多，构建难度大，表达量低；截短后的rsv f蛋白能够被pre-f特异性抗体识别，截短体蛋白不稳定，不能维持融合前构象，免疫后诱导的中和抗体水平低，截短体的稳定化构象需要进一步优化。
5、有鉴于此，特提出本申请实施例的技术方案。
技术实现思路
1、本申请的一个或者多个实施例提供一种rsv pre-f截短体及其生产方法和应用。技术方案包括：
2、本申请的一个或者多个实施例提供一种rsv pre-f蛋白的截短体，所述截短体的结构如结构式i所示：
3、rsv信号肽-[f2多肽的截短肽-f1多肽的截短肽]n-x1-x2式i；
4、其中，
5、x1为无或者嵌合肽1；
6、x2为无或者标签片段；
7、“-”为肽键或者连接子；
8、[f2多肽的截短肽-f1多肽的截短肽]为可串联结构单元；
9、n为1-5范围内任意正整数；
10、所述f2多肽的截短肽保留β2片层的全部或者部分区域，所述f1多肽的截短肽保留β7片层的全部或者部分区域，且每个所述可串联结构单元中，f2多肽的截短肽中的半胱氨酸突变与f1多肽的截短肽中的半胱氨酸突变形成二硫键；
11、所述截短体不含弗林蛋白酶的酶切位点片段；
12、所述截短体满足如下条件：
13、(1)所述f2多肽的截短肽的截取起点为第26位或者第50位，截取终点为第103位至105位中的任意一位；以及，
14、(2)所述f1多肽的截短肽的截取起点为第145位，截取终点为第306位或者第321位。
15、在本申请的一些实施方式中，所述f2多肽的截短肽的n端连接有嵌合肽2；
16、可选地，所述嵌合肽2包括rsv g蛋白。
17、在本申请的一些实施方式中，所述截短体的物种来源包括人和牛中的一种或者多种。
18、在本申请的一些实施方式中，所述f2多肽的截短肽具有如下氨基酸突变中的一个或者多个：y44c、t50c和y53c。
19、在本申请的一些实施方式中，所述f1多肽的截短肽具有如下氨基酸突变中的一个或者多个：q302c、l306c和i309c。
20、在本申请的一些实施方式中，所述f1多肽的截短肽具有如下氨基酸突变中的一个或者多个：s155c、a170c、v179c、s180c、s186c、s190f、v207l、s290c。
21、在本申请的一些实施方式中，所述截短体具有如下氨基酸突变：p102a。
22、在本申请的一些实施方式中，所述截短体具有如下氨基酸突变中的一个或者多个：c37g和c313g。
23、在本申请的一些实施方式中，所述连接子为柔性短肽；
24、可选地，所述柔性短肽为gs、g、s、gs、sg、ss、gg、pg、ggg、ggs、sss、gsg、sgs、gpg、gsgs、gggs、gpgs、gggg、gsgg、ggsg、sggg、gssg、sgsg、gssg、ggpgg或者ggggs。
25、在本申请的一些实施方式中，所述标签片段包括多聚组氨酸；可选地，所述多聚组氨酸包括8his片段。
26、在本申请的一些实施方式中，所述嵌合肽1包括结构性多肽和功能性多肽中的一种或者多种；所述结构性多肽使多个所述截短体的单体形成多聚体，所述功能性多肽增强所述截短体的生物学活性；
27、可选地，所述结构性多肽包括聚集基序、gcn4亮氨酸拉链和纳米颗粒缀合片段中的一种或者多种；
28、可选地，所述功能性多肽包括抗原特异性结合片段。
29、在本申请的一些实施方式中，所述截短体如seq id no.11、seq id no.12、seq idno.14、seq id no.15、seq id no.16、seq id no.17、seq id no.19至seq id no.22以及seq id no.23至seq id no.27中的任一序列所示。
30、本申请的一个或者多个实施例提供一种核酸分子，所述核酸分子编码所述的rsvpre-f蛋白的截短体。
31、本申请的一个或者多个实施例提供一种载体，所述载体包括所述的核酸分子。
32、本申请的一个或者多个实施例提供一种工程细胞，所述工程细胞：
33、(1)表达所述的rsv pre-f蛋白的截短体；或者
34、(2)包括所述的核酸分子或者所述的载体。
35、本申请的一个或者多个实施例提供一种所述的rsv pre-f蛋白的截短体的生产方法，所述生产方法包括如下步骤：
36、培养所述的工程细胞；以及，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.RSV pre-F蛋白的截短体，其特征在于，所述截短体的结构如结构式I所示：
2.根据权利要求1所述的RSV pre-F蛋白的截短体，其特征在于，所述F2多肽的截短肽的N端连接有嵌合肽2；
3.根据权利要求1所述的RSV pre-F蛋白的截短体，其特征在于，所述截短体的物种来源包括人和牛中的一种或者多种。
4.根据权利要求1所述的RSV pre-F蛋白的截短体，其特征在于，所述F2多肽的截短肽具有如下氨基酸突变中的一个或者多个：Y44C、T50C和Y53C。
5.根据权利要求1所述的RSV pre-F蛋白的截短体，其特征在于，所述F1多肽的截短肽具有如下氨基酸突变中的一个或者多个：Q302C、L306C和I309C。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的RSV pre-F蛋白的截短体，其特征在于，所述F1多肽的截短肽具有如下氨基酸突变中的一个或者多个：S155C、A170C、V179C、S180C、S186C、S190F、V207L、S290C。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的RSV pre-F蛋白
8.根据权利要求1至5中任一项所述的RSV pre-F蛋白的截短体，其特征在于，所述截短体具有如下氨基酸突变中的一个或者多个：C37G和C313G。
9.根据权利要求1至5中任意一项所述的RSV pre-F蛋白的截短体，其特征在于，所述连接子为柔性短肽；
10.根据权利要求1至5中任意一项所述的RSV pre-F蛋白的截短体，其特征在于，所述标签片段包括多聚组氨酸；可选地，所述多聚组氨酸包括8His片段。
11.根据权利要求1至5中任意一项所述的RSV pre-F蛋白的截短体，其特征在于，所述嵌合肽1包括结构性多肽和功能性多肽中的一种或者多种；所述结构性多肽使多个所述截短体的单体形成多聚体，所述功能性多肽增强所述截短体的生物学活性；
12.核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1至11中任一项所述的RSVpre-F蛋白的截短体。
13.载体，其特征在于，所述载体包括权利要求12所述的核酸分子。
14.工程细胞，其特征在于，所述工程细胞：
15.权利要求1至11中任一项所述的RSV pre-F蛋白的截短体的生产方法，其特征在于，所述生产方法包括如下步骤：
16.免疫组合物，其特征在于，所述免疫组合物包括：
17.权利要求1至11中任一项所述的RSV pre-F蛋白的截短体在制备呼吸道合胞病毒抗体检测试剂盒中的应用。
18.呼吸道合胞病毒抗体检测试剂盒，其包括权利要求1至11中任一项所述的RSV pre-F蛋白的截短体。
...【技术特征摘要】
1.rsv pre-f蛋白的截短体，其特征在于，所述截短体的结构如结构式i所示：
2.根据权利要求1所述的rsv pre-f蛋白的截短体，其特征在于，所述f2多肽的截短肽的n端连接有嵌合肽2；
3.根据权利要求1所述的rsv pre-f蛋白的截短体，其特征在于，所述截短体的物种来源包括人和牛中的一种或者多种。
4.根据权利要求1所述的rsv pre-f蛋白的截短体，其特征在于，所述f2多肽的截短肽具有如下氨基酸突变中的一个或者多个：y44c、t50c和y53c。
5.根据权利要求1所述的rsv pre-f蛋白的截短体，其特征在于，所述f1多肽的截短肽具有如下氨基酸突变中的一个或者多个：q302c、l306c和i309c。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的rsv pre-f蛋白的截短体，其特征在于，所述f1多肽的截短肽具有如下氨基酸突变中的一个或者多个：s155c、a170c、v179c、s180c、s186c、s190f、v207l、s290c。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的rsv pre-f蛋白的截短体，其特征在于，所述截短体具有如下氨基酸突变：p102a。
8.根据权利要求1至5中任一项所述的rsv pre-f蛋白的截短体，其特征在于，所述截短体具有如下氨基酸突变中的一个或者多个：c37g和c313g...
【专利技术属性】
技术研发人员：崔保峰，胡浩，蒋浩然，周茹，王姗姗，滕忠坤，王文宇，王婧，周翠云，郑海东，于旭博，
申请(专利权)人：苏州聚微生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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