用于展示SHP2的重组毕赤酵母及其构建方法和应用技术

本发明专利技术属于生物工程领域，具体涉及用于展示SHP2的重组毕赤酵母及其构建方法和应用。具体技术方案包括：毕赤酵母(Pichia Pastoris)重组菌株，所述重组菌株通过GPI锚定蛋白将SHP2展示在细胞的表面。本发明专利技术提供一种毕赤酵母重组菌株，可以表面展示SHP2，有效提高了靶蛋白活性。所述重组菌株通过GPI锚定蛋白将SHP2作为靶点蛋白展示在细胞的表面，可用于筛选天然产物复杂体系中的小分子配体。基于表面展示细胞结合配体垂钓技术，并结合HPLC‑MS/MS鉴定结构，本发明专利技术提供了一种灵敏、快速的筛选天然SHP2抑制剂的方法，为发现靶向SHP2的抗癌新药提供了新工具。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程领域，具体涉及用于展示shp2的重组毕赤酵母及其构建方法和应用。

技术介绍

1、细胞内的蛋白磷酸化是一种主要的翻译后修饰，几乎参与了机体内每个生物过程的调节。蛋白质磷酸化是可逆和动态的，由催化蛋白质磷酸化的蛋白酪氨酸激酶(ptk)和去磷酸化的蛋白酪氨酸磷酸酶(ptp)的相反活性调控。由ptpn11编码的含src同源2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶(shp2)是ptp家族中唯一被证实的原癌蛋白，ptpn11基因突变引起shp2的表达上调或异常活化在肿瘤细胞侵袭、转移、增殖、凋亡、耐药性等方面发挥重要调控作用，与乳腺癌、肺癌、黑色素瘤等实体瘤密切相关，因此shp2被认为是一个理想的癌症干预靶标(fodor m,price e,wang p,et al.dual allosteric inhibition of shp2 phosphatase[j].acs chem biol,2018,13(3):647-656；sarver p,acker m,bagdanoff j t,et al.6-amino-3methylpyrimidinones a本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.毕赤酵母(Pichia Pastoris)重组菌株，其特征在于：所述重组菌株将SHP2展示在细胞的表面。

2.根据权利要求1所述重组菌株，其特征在于：所述重组菌株通过GPI锚定蛋白将SHP2展示在细胞的表面。

3.权利要求1或2所述重组菌株的构建方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：将SHP2基因融合于pPICαA-Aga2p上，构建线性化质粒，将所述线性化质粒转入毕赤酵母基因组，将SHP2的N端锚定在Aga2p的C端，将Aga2p亚基与Aga1p亚基结合，Aga1p与毕赤酵母细胞壁的β-葡聚糖共价连接而锚定在细胞壁上，获得所述重组菌株。

4.根...

【技术特征摘要】

1.毕赤酵母(pichia pastoris)重组菌株，其特征在于：所述重组菌株将shp2展示在细胞的表面。

2.根据权利要求1所述重组菌株，其特征在于：所述重组菌株通过gpi锚定蛋白将shp2展示在细胞的表面。

3.权利要求1或2所述重组菌株的构建方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：将shp2基因融合于ppicαa-aga2p上，构建线性化质粒，将所述线性化质粒转入毕赤酵母基因组，将shp2的n端锚定在aga2p的c端，将aga2p亚基与aga1p亚基结合，aga1p与毕赤酵母细胞壁的β-葡聚糖共价连接而锚定在细胞壁上，获得所述重组菌株。

4.根据权利要求3所述构建方法，其特征在于：将aga2p和shp2基因融合构建至载体ppiczαa中，得到线性化质粒。

5.根据权利要求3所述构建方法，其特征在于：所述质粒的构建方法包括：去除信号肽序列；根据毕赤酵母表达系统进行密码子优化，避开sacⅰ酶切位点；将aga2p和s...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖循，翟晓瑞，白小琳，胡义考，
申请(专利权)人：中国科学院成都生物研究所，
类型：发明
国别省市：