一种基于MIRA-CRISPR Cas12a的致病型克罗诺杆菌分型检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于MIRA‑CRISPR Cas12a的致病型克罗诺杆菌分型检测方法，分为对克罗诺杆菌基因组DNA的快速提取、MIRA恒温扩增靶基因、CRISPR Cas12a系统分型检测三步，设计针对菌属和菌种的MIRA特异性引物以及相应的特异性CrRNA；若待测样品中存在克罗诺杆菌，靶基因经MIRA大量扩增后很快被针对靶基因的CrRNA识别，激活Cas12a酶非特异性切割报告探针达到检测目的，结果通过荧光信号或胶体金侧向流层析试纸条判读。本发明专利技术所构建的检测方法操作简单、快速便捷、灵敏度高、适用于现场检测；可在较短的时间内鉴别出待测样品中是否存在克罗诺杆菌污染，并分型判定致病菌种的类型，对有克罗诺杆菌引发的食品安全风险评估具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物现场快速检测，具体涉及到一种基于mira-crisprcas12a的致病型克罗诺杆菌分型检测方法。

技术介绍

1、克罗诺杆菌是常见的食源性致病菌之一，属肠菌科，为兼性厌氧革兰氏阴性杆菌。该菌极其耐干燥，可在婴幼儿配方奶粉、肉类、水果、蔬菜等多种食品中被检测到。克罗诺杆菌的易感人群较为特殊，感染病例大多是婴幼儿，主要感染渠道为婴幼儿配方奶粉。婴幼儿在感染克罗诺杆菌后会引起菌血症、脑膜炎、坏死性小肠结肠炎等症状，致死率高达40％-80％。与其它食源性致病菌相比，克罗诺杆菌对多数人而言感染率较低，但对易感染该菌的特殊群体是致命性的威胁。

2、克罗诺杆菌属包括7个种，最常见的致病菌种为阪崎克罗诺杆菌、丙二酸盐克罗诺杆菌、苏黎世克罗诺杆菌。虽然目前已有针对克罗诺杆菌菌属和阪崎克罗诺杆菌的多种便携式的试剂盒及快速检测方法，但尚无针对常见致病型克罗诺杆菌的快速分型检测方法，该方法的建立有助于食品安全的风险评估和疾病预防控制。

3、经检索，克罗诺杆菌快检试剂盒及相关快检方法多以分子检测为主，检测结果稳定、可靠，但多数分子检测方法本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于MIRA-CRISPR Cas12a的致病型克罗诺杆菌分型检测方法，其特征在于：包括，

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述高温煮沸菌液，包括，取新鲜菌液，100℃高温煮沸10min。

3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述MIRA产物的制备方法包括，

4.如权利要求1～3中任一所述的检测方法，其特征在于：所述CRISPR Cas12a荧光系统检测体系如下：

5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于：所述酶标仪，其中，设定激发波长494nm，发射波长520nm，孵育温度37℃，动力学循环120次，每30s...

【技术特征摘要】

1.一种基于mira-crispr cas12a的致病型克罗诺杆菌分型检测方法，其特征在于：包括，

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述高温煮沸菌液，包括，取新鲜菌液，100℃高温煮沸10min。

3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述mira产物的制备方法包括，

4.如权利要求1～3中任一所述的检测方法，其特征在于：所述crispr cas12a荧光系统检测体系如下：

5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于：所述酶标仪，其中，设定激发波长494nm，发射波长520nm，孵育温度37℃，动力学循环120次，每30s读取一...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵欣，杨亚玲，郭峻，胡孔新，王静，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：