一种基于CRISPR/Cas13a系统的侧流生物传感器及其制备方法与应用技术方案

本发明专利技术涉及生物检测领域，特别涉及一种基于CRISPR/Cas13a系统的侧流生物传感器及其制备方法和应用。所述侧流生物传感器，包括：CRISPR/Cas13a反应体系和试纸条；CRISPR/Cas13a反应体系包括Cas13a蛋白、crRNA、报告探针；试纸条包括底板以及在所述底板上依次搭接的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；其中，结合垫上固定有金纳米探针；硝酸纤维素膜上包括固定有链霉亲和素的质控线、固定有捕获DNA的检测线。当miR‑21存在时，miR‑21与crRNA互补配对，激活Cas13a蛋白对报告探针进行切割得到切割产物，切割产物与金纳米探针结合，再与捕获DNA互补配对，从而在检测线上产生可视信号和拉曼信号。该侧流生物传感器能够实现从“无”到“有”的信号响应，且具有较高的灵敏度，检测限可达aM级别。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测领域，特别涉及一种基于crispr/cas13a系统的侧流生物传感器及其制备方法与应用。

技术介绍

1、 mirna是人类癌症早期诊断和预后的新兴生物标志物之一，但其在人体内丰度很低，约为总rna质量的0.01%。因此，开发具有高灵敏度、特异性和稳定性的mirna即时检测技术对于实现癌症风险指示、早期癌症检测和肿瘤分类尤为重要。

2、近年来，以rna引导的crispr/cas系统在核酸诊断领域越来越受欢迎，是下一代分子诊断技术的潜在候选者。一些常见的cas核酸酶，尤其是cas12家族和cas13家族，属于2类v型和vi型cas蛋白，显示出扩增的侧支切割机制，可以在识别目标序列后非特异性地切割周围的任何单链核酸。其中，cas13a是一种rna引导的核酸内切酶，可以开发直接的rna检测，而不需要rna反转录步骤，具有为特异性rna传感提供平台的巨大潜力。cas13a的crrna包含一个可以促进与cas13a相互作用的单茎环区和一个与靶序列互补的引导区。在crrna对靶rna的识别下，cas13a可以直接被引导到靶细胞并被激活从本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于CRISPR/Cas13a系统的侧流生物传感器，其特征在于，包括：CRISPR/Cas13a反应体系和试纸条；

2.根据权利要求1所述的侧流生物传感器，其特征在于，所述检测线上还固定有链霉亲和素，所述捕获DNA的5’末端修饰有生物素；所述质控线靠近所述结合垫的一侧，所述检测线靠近所述吸水垫的一侧。

3.根据权利要求1所述的侧流生物传感器，其特征在于，所述CRISPR/Cas13a反应体系中，所述Cas13a蛋白、crRNA、报告探针的质量比1︰1︰5。

4.根据权利要求1所述的侧流生物传感器，其特征在于，所述拉曼报告分子选自4-巯基苯甲腈、...

【技术特征摘要】

1.一种基于crispr/cas13a系统的侧流生物传感器，其特征在于，包括：crispr/cas13a反应体系和试纸条；

2.根据权利要求1所述的侧流生物传感器，其特征在于，所述检测线上还固定有链霉亲和素，所述捕获dna的5’末端修饰有生物素；所述质控线靠近所述结合垫的一侧，所述检测线靠近所述吸水垫的一侧。

3.根据权利要求1所述的侧流生物传感器，其特征在于，所述crispr/cas13a反应体系中，所述cas13a蛋白、crrna、报告探针的质量比1︰1︰5。

4.根据权利要求1所述的侧流生物传感器，其特征在于，所述拉曼报告分子选自4-巯基苯甲腈、5，5’-二硫代双（2-硝基苯甲酸）中的一种。

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【专利技术属性】
技术研发人员：刘聪慧，朱炎，杨欣瑶，刘翼振，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：