本发明专利技术公开了南瓜蛋白在制备治疗慢性粒细胞白血病药物中的应用。南瓜蛋白与ＢＣＲ－ＡＢＬ酪氨酸激酶抑制剂联用时，对慢性粒细胞白血病细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用均明显增强，具有协同作用。因而，南瓜蛋白可与酪氨酸激酶抑制剂联合用于治疗慢性粒细胞白血病。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及南瓜蛋白在制备治疗慢性粒细胞白血病药物中的应用，尤其 涉及南瓜蛋白与酪氨酸激酶抑制剂联合应用治疗慢性粒细胞白血病的用途。
技术介绍
慢性粒细胞白血病(CML)是造血干细胞恶性克隆增生性疾病，发病率 占成人白血病的15% 20%。 950/。CML患者具有特征性的Ph染色体，即9号染 色体abl原癌基因转移到22号染色体的bcr断裂聚集区，形成bcr-abl融合基因， 其编码的BCR-ABL蛋白具有很强的酪氨酸激酶活性，可通过干扰正常细胞信 号传导，刺激粒细胞异常增殖并抑制其凋亡，是CML发病的分子基础。因此， 靶向于该融合基因及其表达产物已成为CML治疗的重要策略。STI571 (甲磺 酸伊马替尼，imatinib)是人工合成的BCR-ABL酪氨酸激酶特异性抑制剂，治 疗CML具有细胞遗传学缓解效果，是近来公认的治疗CML的有效药物，但其 对CML急变患者的疗效仍不理想，并且单用STI571治疗容易出现耐药，导致 治疗失败。因此，继续寻找治疗CML的更为有效的新药，尤其是能与STI571 产生协同作用或逆转其耐药性的药物与治疗方案仍是CML治疗的迫切任务与 研究热点。从理论上讲，STI571等酪氨酸激酶抑制剂仅影响BCR-ABL蛋白的功能， 而不能抑制该融合蛋白的表达，从而在治疗上存在缺陷。因此，开发抑制 BCR-ABL蛋白表达的药物无疑是治疗CML的更为有效的途径，也将是克服 酪氨酸激酶抑制剂耐药性的主要措施。抑制BCR-ABL蛋白表达可以通过封 闭bcr- abl DNA、千扰bcr- abl mRNA及抑制bcr-abl翻译等环节实现。前两 种方法，因技术条件限制，可能在未来很长一段时间内仍无法应用于临床； 目前也尚未有BCR-ABL蛋白合成的特异性抑制剂。而抑制蛋白生物合成的 一类活性物质一核糖体失活蛋白(ribosome画inactivating protein, RIP)有可能在 翻译环节下调BCR-ABL蛋白，值得关注。核糖体失活蛋白广泛存在于高等植物中，通常按结构不同分为两型1 型RIP为单链蛋白，如天花粉蛋白(TCS)，在植物RIP中占多数；2型RIP是通 过二硫键连接的双链蛋白，如蓖麻毒素(ricin)。 2型RIP的A链与1型RIP— 样，是一类RNAN-糖苷酶或多核苷酸腺苷糖苷酶，能专一地水解真核细胞 核糖体28S rRNA第4324位上的腺嘌呤碱基与核糖之间的N-C糖苷键，释放出一个腺嘌呤碱基，从而阻遏了延长因子与核糖体的结合，抑制蛋白质的生物合成，具有抗生育、抗病毒和抗肿瘤等多种生物学活性。由于2型RIP的B 链具有凝集素的功能，可识别正常细胞表面的D-半乳糖，因而有很大的毒性， 限制了其在人体内的应用。而1型RIP由于不具有B链，对人体的毒性较小， 作为抗肿瘤药物更具应用前景。南瓜蛋白(cucuraiosin， CUS)是从南瓜瓜瓤中提取的新的l型核糖体失 活蛋白，为碱性单肽链糖蛋白。我们测定了其氨基酸序列和DNA顺序，培养 出单晶并测定了其结构(Chen MH, Ye XM， Cai JH, et al. Crystallization and preliminary crystallographic study of cucurmosin ,a ribosome-inactivating protein from the sarcocarp of cucurbita moschata. ^cta OyM,2000, D56:665-666; Shi XL, Zhou EX，Ye XM， et al. Molecular replacement studies of cucurmosin from Ct/cwrZ)"a woscAa a:structure homology with trichosanthin.C7n.wese /iSVrwcf Ozew, 2003,22:165-168;陈明晃,叶晓明.一种多肽一具有南瓜蛋白的N端顺序 的多肽.中国,专利技术专利，03135045.3, 2003-09-29;陈明晃,谢捷明,等.南瓜蛋 白及其编码基因.中国，专利技术专利，200710008402.6, 2007-01-10)。我们前期 的研究表明南瓜蛋白具有RNA N-糖苷酶活性，能显著抑制多种肿瘤细胞增 殖及诱导凋亡(谢捷明,陈明晃,等.南瓜蛋白在制药中的应用.中国,专利技术专 利，200510119741.2,2005-11-03)，尤其对人CML细胞K562 (Ph+)的作用强， 活性比同类的天花粉蛋白强4-7倍，而对人正常肝细胞株和外周血淋巴细胞的 抑制作用较小，表现出明显的选择性。近期我们还发现南瓜蛋白能明显下调 K562细胞的BCR-ABL蛋白(P21 据此，我们推测南瓜蛋白与STI571联合 应用，可从蛋白表达水平和蛋白酪氨酸激酶活性两方面双重抑制BCR-ABL蛋 白，从而产生协同抗CML作用。
技术实现思路
本专利技术的目的是通过研究南瓜蛋白与酪氨酸激酶抑制剂的联合应用时的 抗慢性粒细胞白血病活性，提供南瓜蛋白在制备治疗慢性粒细胞白血病药物 中的应用本专利技术的专利技术人的研究表明，南瓜蛋白与BCR-ABL酪氨酸激酶抑制剂联 用时，对慢性粒细胞白血病细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用均明显增强，具 有协同作用。因而，南瓜蛋白可与酪氨酸激酶抑制剂联合用于治疗慢性粒细 胞白血病。具体实施例方式下面用具体的实施例来说南瓜蛋白联合酪氨酸激酶抑制剂对慢性粒细胞 白血病细胞的作用。下列实施例只用于说明本专利技术，而对本专利技术的保护范围 无任何限制作用。实施例1:南瓜蛋白联合STI571对K562细胞的抑制作用方法取对数生长期的K562细胞，接种于96孔培养板上，每孔接种量 6xl03/120pL。实验组分CUS组(2和4mg/L)、 STI571组(0.05、 0.1、 0.2和 0.4pmol/L)及CUS+STI571组(上述不同浓度的CUS和STI571的联合)，每孔 加20pL，设4个复孔；阴性对照组每孔加等量溶剂，设8个复孔，空白对照孔 加营养液140nL,用于仪器调零。置5%(302、 37'C培养72h,每孔加5mg/mL 的MTT 10pL，继续培养4h，每孔加裂解液(10%SDS， 5%异丁醇，用HCL 调至pH4.5) 140pL， 37。C放置24h，用酶标仪测定各孔的吸光度"57。)值。 计算联合用药指数(CDI)。 CDI-Sa+b/CSaX^)， 5"a+b表示药物联合作用组细胞 的存活部分与阴性对照的比值，SA和^分别代表A药和B药单独使用组细胞的 存活部分与阴性对照的比值;CDK1、CDI二1和CDI〉1分别表示两药有协同、 相加和拮抗作用，当CDK0.75时，表示两药协同作用非常显著。 结果见表l表1不同浓度南瓜蛋白联合STI-571对K562细胞的抑制作用(；±^ ，n=4)STI-57102(mg/L)4(mLg/L)(|xmol/L )^570^570CDI^570CDI01.54±0.080.96±0.07——0.63±0.03——0.051.51±0.040.73±0.020.780.46±0.010.730.11.23本文档来自技高网...
【技术保护点】
南瓜蛋白在制备用于治疗慢性粒细胞白血病药物中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：谢捷明，陈明晃，
申请(专利权)人：福建医科大学，中国科学院福建物质结构研究所，
类型：发明
国别省市：35[中国|福建]
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