【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及病毒学，具体涉及一种鼠适应柯萨奇a4型病毒株及其感染模型的构建方法。
技术介绍
1、手足口病(hand foot and mouth disease，hfmd)是由多种肠道病毒引起的传染性疾病，主要感染5岁及5岁以下的婴儿和儿童。肠道病毒是引起hfmd的病原体，属于小rna病毒科肠道病毒属，其共有116个血清型，引起手足口病的肠道病毒有20多种(型)，以肠道病毒71型、柯萨奇病毒a16型最为常见。2009年之前，肠道病毒71型、柯萨奇病毒a16型(coxsackievirus a16)是优势流行株。但2009年之后，其它类型的肠道病毒如cva4、cva6、cva10的流行率逐年增加。
2、cva4病毒株于1948年首次在美国分离，cva4感染患儿主要引起疱疹性咽峡炎、发热、皮疹等症状，给患儿身心健康带来不利影响，加重全球公共卫生负担。
3、目前，临床上常采用广谱抗病毒药利巴韦林治疗手足口病，尚无针对手足口病的特效药物。《手足口病诊疗指南》2018版推荐早期使用干扰素α和利巴韦林，但只能发挥对症治疗作用，且利巴韦林长期应用会产生生殖毒性。应对eva71(肠道病毒a71型)和cva16感染相关治疗药物研究较多，且随着eva71疫苗接种率的普及，感染ev71所致手足口病的患儿数量大大减少，但疫苗对不同亚型交叉保护性差。因此，疫苗以及药物的研究重点应当转移至其他肠道病毒。
4、理想的感染疾病动物模型是研究传染性疾病传播途径、致病机制及病理损伤等特征的重要载体，也是评价疫苗、药物有效和安全
技术实现思路
1、为克服现有技术所存在的缺陷，现提供一种鼠适应柯萨奇a4型病毒株及其感染模型的构建方法，以解决柯萨奇病毒a4型病毒株采用1到7日龄乳鼠造模存在的体型过小、给药剂量与方式受限、免疫系统发育不全、困难、感染模型的制备难度较大的问题。
2、为实现上述目的，提供一种鼠适应柯萨奇a4型病毒株，所述病毒株的保藏号为cctcc no：v202432。
3、进一步的，所述病毒株来源于临床分离的高致病性柯萨奇毒株。
4、进一步的，将所述病毒株通过小鼠肌肉接种在11日龄乳鼠体内与人rd细胞反复传代10次后所驯化获得的对7-15日龄乳鼠呈高致死性的鼠适应柯萨奇a4型病毒株。
5、进一步的，所述病毒株感染的细胞类型包括非洲绿猴肾细胞、或人横纹肌肉瘤细胞。
6、进一步的，所述病毒株在制备预防或治疗由类似所述柯萨奇病毒株所致传染病的疫苗及诊断试剂中的应用。
7、本专利技术提供一种鼠适应柯萨奇a4型病毒株的病毒混悬液的制备方法，将所述病毒株采用无灭活病毒作用的缓冲液稀释所制得的病毒稀释液接种能支持柯萨奇病毒复制的细胞以制备病毒混悬液。
8、本专利技术提供一种鼠适应柯萨奇a4型病毒株的病毒混悬液的制备方法，将所述病毒株采用无灭活病毒作用的缓冲液稀释所制得的病毒稀释液通过肌肉注射接种11日龄乳鼠，再将所述乳鼠的动物组织匀浆或研磨制备病毒混悬液，并将其在rd细胞上扩增后再次肌肉注射接种于11日龄乳鼠，rd细胞上扩增，如此反复10次，获得体内驯化增强的cva4毒株。
9、本专利技术提供一种采用鼠适应柯萨奇a4型病毒株建立柯萨奇病毒a4型病毒感染模型的方法，包括以下步骤：
10、将鼠适应柯萨奇a4型病毒株的病毒混悬液采用无灭活病毒作用的缓冲液配制获得病毒混悬稀释液；
11、将所述病毒混悬稀释液经肌肉注射至乳鼠体内所制得的柯萨奇病毒a4型病毒感染模型。
12、进一步的，所述乳鼠日龄为7-15日龄乳鼠。
13、进一步的，所述7-15日龄乳鼠肌内注射感染的病毒滴度范围可以为10-105tcid50/只。
14、进一步的，还包括将所述柯萨奇病毒a4型病毒感染模型用于研究hfmd的发病机制、评价疫苗的有效性及抗病毒药物的筛选。
15、本专利技术的有益效果在于，本专利技术的鼠适应柯萨奇a4型病毒株是一株新的柯萨奇cva4鼠适应病毒株，其滴度为108.8tcid50，用其建立7日龄以上乳鼠手足口病感染模型，能够呈现与人类疾病尤其是手足口病相似的病理变化。同时与以往1、3或者7日龄等小日龄乳鼠模型相比，本专利技术构建的乳鼠手足口病感染模型解决了小日龄乳鼠给药困难、给药容量低等缺陷，使得乳鼠模型能够适用于较长时间的药效观察和疫苗评价，此模型在研究hfmd的发病机制、评价疫苗的有效性及抗病毒药物的筛选等方面具有十分重要的作用。
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1.一种鼠适应柯萨奇A4型病毒株，其特征在于，所述病毒株的保藏号为CCTCC NO：V202432。
2.根据权利要求1所述的鼠适应柯萨奇A4型病毒株，其特征在于，所述病毒株来源于临床分离的高致病性柯萨奇毒株。
3.根据权利要求1所述的鼠适应柯萨奇A4型病毒株，其特征在于，将所述病毒株通过小鼠肌肉接种在11日龄乳鼠体内与人RD细胞反复传代10次后所驯化获得的对7～15日龄乳鼠呈高致死性的鼠适应柯萨奇A4型病毒株。
4.根据权利要求1所述的鼠适应柯萨奇A4型病毒株，其特征在于，所述病毒株在制备预防或治疗由类似所述柯萨奇病毒株所致传染病的疫苗及诊断试剂中的应用。
5.一种如权利要求1中所述的鼠适应柯萨奇A4型病毒株的病毒混悬液的制备方法，其特征在于，将所述病毒株采用无灭活病毒作用的缓冲液稀释所制得的病毒稀释液接种能支持柯萨奇病毒复制的细胞以制备病毒混悬液。
6.一种如权利要求1中所述的鼠适应柯萨奇A4型病毒株的病毒混悬液的制备方法，其特征在于，将所述病毒株采用无灭活病毒作用的缓冲液稀释所制得的病毒稀释液通过肌肉注射接种11日
7.一种采用鼠适应柯萨奇A4型病毒株建立柯萨奇病毒A4型病毒感染模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述乳鼠日龄为7-15日龄乳鼠。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述7-15日龄乳鼠肌内注射感染的病毒滴度范围可以为10-105TCID50/只。
10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，还包括将所述柯萨奇病毒A4型病毒感染模型用于研究HFMD的发病机制、评价疫苗的有效性及抗病毒药物的筛选。
...【技术特征摘要】
1.一种鼠适应柯萨奇a4型病毒株，其特征在于，所述病毒株的保藏号为cctcc no：v202432。
2.根据权利要求1所述的鼠适应柯萨奇a4型病毒株，其特征在于，所述病毒株来源于临床分离的高致病性柯萨奇毒株。
3.根据权利要求1所述的鼠适应柯萨奇a4型病毒株，其特征在于，将所述病毒株通过小鼠肌肉接种在11日龄乳鼠体内与人rd细胞反复传代10次后所驯化获得的对7～15日龄乳鼠呈高致死性的鼠适应柯萨奇a4型病毒株。
4.根据权利要求1所述的鼠适应柯萨奇a4型病毒株，其特征在于，所述病毒株在制备预防或治疗由类似所述柯萨奇病毒株所致传染病的疫苗及诊断试剂中的应用。
5.一种如权利要求1中所述的鼠适应柯萨奇a4型病毒株的病毒混悬液的制备方法，其特征在于，将所述病毒株采用无灭活病毒作用的缓冲液稀释所制得的病毒稀释液接种能支持柯萨奇病毒复制的细胞以制备病毒混悬液。
6.一种如权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：张评浒，苏勤，王荣花，周佳雪，刘思彤，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：
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