组织工程产品的低温保存液及其使用方法技术

一种组织工程产品的低温保存液，本发明专利技术是以ＤＭＥＭ培养液为基础溶剂，添加有维生素Ｂ，维生素Ｃ，硫酸软骨素，β－整合素，色甘酸钠，细胞松弛素Ｂ，Ｌ－谷氨酰胺，牛血清白蛋白，胎牛血清，海藻糖，Ｎａ２ＣＯ３，聚蔗糖－７０，以及在冻存中添加的二甲基亚砜。本发明专利技术对细胞的毒性小、保存时间长，在－８０℃下可保存６个月，在液氮中可保存１２～１８个月，且复苏后的细胞活性可以达到６０％以上；所保存的组织在复苏使用时简单方便，只需在３７℃水浴中复苏３～５分钟，并用无菌生理盐水涮洗即可。本发明专利技术的应用范围广，适用于组织工程皮肤、组织工程角膜、组织工程血管、组织工程神经等，也适用于正常组织的低温保存。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医学材料组织工程
，具体涉及一种组织工程产品的低温保存方法。
技术介绍
组织工程产品是由细胞和三维支架构建的人造组织或器官，如体外构建的组织工程皮肤就是应用组织工程学方法，将种子细胞与支架材料结合构建的功能性皮肤替代物，再将其种植于创面，在支架材料逐渐降解吸收的过程中，使细胞正常生长、分化并形成具有一定功能的组织，达到替代、修复、再生受损组织或器官的目的。组织工程的最终目标是实现规模产业化，因此组织工程产品的长期保存是不可或缺的重要环节。 由于组织工程产品含有活细胞，因此在保存时选用低温冻存法较为适宜。低温冻存是一种完全抑制细胞能量代谢，使之处于休眠状态从而长期保存的方法。按降温速率分类，低温冻存通常分为慢速降温和快速降温二类。 快速降温法是以易形成玻璃化态的低温保存液为介质，利用快速降温的方法(通常为直接浸入液氮)保存细胞或组织。玻璃化冻存保存液主要由易于形成玻璃化态的渗透性试剂(通常采用乙二醇、二甲基亚砜、甘油、甲酰胺等)和使细胞脱水的非渗透性试剂(通常采用低分子量的果糖、乳糖、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、海藻糖、密三糖，和高分子量的聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组织工程产品的低温保存液，其特征在于，所述的低温保存液以ＤＭＥＭ培养液为基础溶剂，按重量体积比添加的组分包括：维生素Ｂ５～２５μｇ／ｍｌ，维生素Ｃ５～２５μｇ／ｍｌ，硫酸软骨素２～６％，β－整合素０．１～０．５％，色甘酸钠２～５μｇ／ｍｌ，细胞松弛素Ｂ２～５μｇ／ｍｌ，Ｌ－谷氨酰胺２～８ｍＭ，牛血清白蛋白１～３％，胎牛血清５～１０％，海藻糖３～１０％，Ｎａ↓［２］ＣＯ↓［３］０．２～０．３％，聚蔗糖－７０２～５％，二甲基亚砜５％～１５％；其中二甲基亚砜是在冻存过程中添加。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：金岩，罗海浪，张勇杰，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，西安组织工程工程技术研究中心，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]