黄芩花粉离体萌发液体培养基及测定黄芩花粉活力的方法技术

本发明专利技术公开了一种黄芩花粉离体萌发液体培养基及其用于测定黄芩花粉活力的方法，黄芩离体萌发液体培养基是以蒸馏水为溶剂，其包含的组分为ＢＫ、１００ｇ／Ｌ的蔗糖和１５０ｇ／Ｌ的ＰＥＧ４０００，ｐＨ为５．８；利用该黄芩花粉离体萌发液体培养基与花粉管生长测定技术测定花粉活力测定结果稳定可靠，花粉萌发率反应有生活力花粉所占比例，花粉管生长的观察与测量反应花粉粒生理状况的优劣，黄芩花粉离体萌发与花粉管生长测定技术为黄芩花粉活力的测定提供了一种可靠、有效的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物花粉活力测定
，涉及一种培养基，特别涉及一种黄芩花粉离体萌发液体培养基，以及利用该黄芩花粉离体萌发液体培养基测定黄芩花粉活力的方 法。
技术介绍
黄芩(Scutellaria Baicalensis)是唇形科植物，同属植物共有300多种，广布世 界各地，我国有101种及29个变种。黄芩味苦性寒，具有清热燥湿泻火解毒、凉血止血、除 热安胎的功效，也可用于泡茶，有清凉败火、消炎去暑的功效。 近年来随着黄芩降压、抗变态反应和清除超氧阴离子等药理作用相继被发现，使社会对黄芩原材料的需求迅速增加，单靠野生黄芩资源已不能满足需求，目前黄芩已驯化成功并被大面积栽培，以满足社会需求，但各地生产中优良品种较为缺乏，已严重影响了我国黄芩生产的发展，因此，开展优良品种的选育是黄芩研究者的一项重要工作。进行黄芩花粉活力测定的研究，对种质资源保存与创新、优良品种的选育具有理论和实践意义。 黄芩为两性花，开花后花粉成熟并自花粉囊中散出，成熟的花粉粒具有一定的活力，在田间条件下其活力能保持一定时间，但随时间的推移其活力会发生一定的变化，了解黄芩开花后花粉活力在田间的变化规律，对黄芩杂交体系的建立以及黄芩传粉类型的花粉都具有十分重要的意义。目前，花粉活力测定的方法主要有显微镜形态观察法、染色法、离体萌发法等。 形态观察法是依据不育花粉在生长过程中由于受到某些因素的影响，发育不完全 或不良的花粉粒形态常常呈畸形，而正常花粉有规则的外形。黄芩正常花粉粒为椭圆形或 近圆形，而不育花粉呈不规则形，根据形态可以鉴别花粉活力。然而，黄芩花粉成熟后常常 需要贮藏一段时间，贮藏过程中花粉活力会逐渐下降，由于黄芩正常花粉在贮藏过程中活 力可能丧失，但形态并不发生明显变化；从而使得花粉粒形态观察法就不能鉴别贮藏后正 常花粉活力变化情况。 染色法是通过使用染色试剂对花粉粒进行染色，依据颜色变化判断花粉活力的高 低，常用的染色试剂有I2-KI溶液和氯化三苯基四氮唑(TTC)等。用I2-KI溶液对发育良 好的黄芩成熟花粉进行染色，花粉粒而没有被染成蓝色，而呈浅黄褐色，表明I2-KI溶液染 色法不能测定黄芩花粉活力；而TTC染色法测定花粉活力实验重复性较差，会造成很大的 实验误差，也不能准确测定花粉的实际活力高低。 花粉离体萌发与花粉管生长测定结果较为稳定，更能反应花粉活力的实际状况。 但花粉离体萌发需要适宜的培养基，常用的培养基基本成分是糖和硼酸，蔗糖浓度一般为 10% 20%，硼酸为0. 001% 0. 005%， pH值为5. 5 6. 5。 不同植物花粉萌发需要的培养基种类和浓度不同，二核型花粉较易萌发，在一般 基本培养基上培养即可，而三核型花粉较难萌发，要在基本培养基的基础上添加其它促进 花粉萌发的元素，如C^+，Mg气K^PEG等成分。近年来，人们对药用植物花粉离体萌发和花3粉管生长进行了较多研究，赵宏波等认为PEG对菊花、梅花花粉离体萌发生长具有显著促 进作用；牛东玲等报道了肉苁蓉花粉离体萌发的适宜培养基，陈和明等研究了黄藤花粉离 体萌发条件及低温贮藏对花粉活力的影响。然而，关于黄芩花粉离体萌发与花粉管生长的 研究国内外尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种黄芩花粉离体萌发液体培养基及其用于测定黄芩花 粉活力的方法，在确定黄芩花粉离体萌发培养体系的基础上，对黄芩花粉离体培养，并能够 可靠、有效的测定黄芩花粉活力。 为了实现上述任务，本专利技术是通过以下技术方案得以实现 —种黄芩花粉离体萌发液体培养基，其特征在于，制得的该黄芩花粉离体萌发液 体培养基是以蒸馏水为溶剂，其中含有100g/L的蔗糖、150g/L的PEG、以及BK培养基，pH值 为5.8 ; 所述BK培养基由下列原料组成:H萬:100mg/L， Ca (N03) 2 4H20 :300mg/L， MgS04 7H20 :200mg/L， KN03 :100mg/L。 上述黄芩花粉离体萌发液体培养基用于测定黄芩花粉活力的方法，其特征在于，包括以下步骤 1)花粉采集选取发育正常、无病虫危害的健壮黄芩植株，盛花期于上午7:00 8:00选取正开 花的花序，摘除已开放的小花后连同一段枝叶一同将花序采下，迅速移入盛有清水的三角 瓶中，带回实验室待花蕾自然开放，花粉从花药中散出，将花粉收集起来备用； 2)花粉离体萌发及花粉管生长 取权利要求1所述的黄芩花粉离体萌发液体培养基，滴入凹形载玻片凹槽中，用 毛笔蘸取适量黄芩花粉匀撒在液体培养基上，置于底部垫有双层滤纸的培养皿中，盖紧盖 子并放入恒温培养箱内3(TC离体光照萌发培养，花粉离体萌发培养20min后，部分花粉开 始萌发，花粉萌发后的花粉管长度超过花粉粒直径后，花粉管开始快速生长； 3)花粉活力的测定 离体光照萌发培养3h后，进行花粉萌发率统计和花粉长度测量；以花粉管长度大 于花粉直径为花粉萌发标准，每处理重复3次，每重复随机观察3个视野，每视野观察花粉 数不少于50粒，统计花粉萌发率反应有活力的花粉所占比例；同时，用显微测微尺测量花 粉管长度，每视野随机测量10个花粉，每处理共测90个花粉管长度，计算其平均值，花粉离 体萌发花粉管生长情况即可反应花粉粒生理状况的优劣。 本专利技术与现有技术相比，具有以下有益的技术效果 1、黄芩花粉在本专利技术提供的黄芩花粉离体萌发液体培养基上，3(TC光照条件下培 养，黄芩花粉萌发率可达到89. 3%，花粉管也能得到较好生长；由于添加了 PEG，黄芩花粉 管生长较直，便于观察测量。 2、利用该黄芩花粉离体萌发液体培养基与花粉管生长测定技术测定花粉活力测 定结果稳定可靠，花粉萌发率反应有活力花粉所占比例，花粉管生长的观察与测量反应花 粉粒生理状况的优劣，为黄芩花粉活力的测定提供了一种可靠、有效的方法。附图说明 图1为黄芩花粉离体培养不同时间的花粉萌发率和花粉管的统计图；其中，A :萌发的花粉；B :生长2h的花粉管；C :生长4h的花粉管； 图2为培养时间对花粉萌发生长的影响曲线。 以下结合附图和实施例对本专利技术作进一步的详细说明。具体实施例方式按照本专利技术的技术方案，首先制备黄芩花粉离体萌发液体培养基，该黄芩花粉离 体萌发液体培养基是以蒸馏水为溶剂，其中含有100g/L的蔗糖、150g/L的PEG、以及BK，pH 值为5. 8 ; 所述BK由下列原料组成:H萬:100mg/L， Ca(N03)2 4H20 :300mg/L， MgS04 7H20 : 200mg/L， KN03 :100mg/L。 在确定黄芩花粉离体萌发液体培养基的基础上，利用该黄芩花粉离体萌发液体培 养基对黄芩花粉离体培养，测定花粉的萌发率和花粉管的生长情况，能够可靠、有效的测定 黄芩花粉活力。 以下是专利技术人给出的实施例，该实施例是本专利技术较优的例子，主要用于进一步解 释和理解本专利技术，本专利技术不限于该实施例。 1、黄芩花粉的采集 黄吝花粉为2008年7月中旬采自陕西商洛香菊制药公司药用植物园2年生黄吝 群体。采集方法为选取发育正常、无病虫危害的健壮植株，于盛花期上午7:00 8:00选 取正开花的花序，连同一段枝叶一同将花序采下，迅速移入盛有清水的三角瓶中，放置室内 待花蕾自然开放，花粉本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种黄芩花粉离体萌发液体培养基，其特征在于，制得的该黄芩花粉离体萌发液体培养基是以蒸馏水为溶剂，其中含有１００ｇ／Ｌ的蔗糖、１５０ｇ／Ｌ的ＰＥＧ、以及ＢＫ培养基，ｐＨ值为５．８；　　所述ＢＫ培养基由下列原料组成：Ｈ↓［３］ＢＯ↓［３］：１００ｍｇ／Ｌ，Ｃａ（ＮＯ↓［３］）↓［２］.４Ｈ↓［２］Ｏ：３００ｍｇ／Ｌ，ＭｇＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ：２００ｍｇ／Ｌ，ＫＮＯ↓［３］：１００ｍｇ／Ｌ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：呼天明，杨培志，刘志刚，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]