用于肺孢子菌检测的crRNA及其试剂组合物和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于肺孢子菌检测的试剂组合物及方法和应用。该试剂组合物包括ssDNA报告分子、Cas12a蛋白、crRNA、检测缓冲液以及无核酸酶水，crRNA能够特异性靶向靶核苷酸序列。本发明专利技术的试剂组合物能够基于RPA和CRISPR/Cas12a检测反应实现对肺孢子菌的检测，本发明专利技术提供的检测方法具有耗时短、操作简单且不依赖大型实验设备等优势；而且检测针对特定的靶核苷酸序列进行，该靶核苷酸序列在肺孢子菌中具有高度保守性，能够显著提升检测灵敏度和特异性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于核酸体外检测，具体而言，涉及一种用于肺孢子菌检测的crrna及其试剂组合物和应用。

技术介绍

1、肺孢子菌(pneumocystis jiroveci)，原名卡氏肺孢子虫，是一种机会感染性真菌，特别倾向于感染免疫力受损的人类及多种哺乳动物。自1942年jiroveci等学者首次从肺炎患者的肺组织中分离出该病原体以来，1988年通过对其核糖体小亚基rna序列分析确认其归属于真菌类别，并正式更名为肺孢子菌。其中，感染人类的特定种类被定义为肺孢子菌，所引发的疾病即为肺孢子菌病(pneumocystis pneumonia,pcp)。该疾病主要作为免疫系统功能严重受损群体的并发疾病出现，主要的发病人群一般为艾滋病患者、长期接受肾上腺皮质激素、化疗药物或放射治疗的恶性肿瘤及白血病患者，以及器官移植术后的康复者。在获得性免疫缺陷综合症患者中，pcp并发率可高达85％，并直接关联过半数的pcp相关死亡病例。然而，pcp的确诊存在显著难度，因为肺孢子菌无特异性临床症状，且体外无法培养，通常依靠染色法对肺组织或肺泡灌洗液等样本进行诊断，但此类方法需采用侵入性取本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于肺孢子菌检测的crRNA，其特征在于，所述crRNA的序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一种基于权利要求1所述一种用于肺孢子菌检测的crRNA的用于肺孢子菌检测的试剂组合物，其特征在于，按照体积分数计，所述试剂组合物包括1～10份crRNA、1～4份Cas12a蛋白和2～6份ssDNA报告分子。

3.根据权利要求2所述的一种用于肺孢子菌检测的试剂组合物，其特征在于，所述crRNA浓度为0.5μM～2μM，所述Cas12a蛋白浓度为1μM～2.5μM，所述ssDNA报告分子的浓度为1μmol/L～2μmol/L。

4.根据权利要求2所述...

【技术特征摘要】

1.一种用于肺孢子菌检测的crrna，其特征在于，所述crrna的序列如seq id no.2所示。

2.一种基于权利要求1所述一种用于肺孢子菌检测的crrna的用于肺孢子菌检测的试剂组合物，其特征在于，按照体积分数计，所述试剂组合物包括1～10份crrna、1～4份cas12a蛋白和2～6份ssdna报告分子。

3.根据权利要求2所述的一种用于肺孢子菌检测的试剂组合物，其特征在于，所述crrna浓度为0.5μm～2μm，所述cas12a蛋白浓度为1μm～2.5μm，所述ssdna报告分子的浓度为1μmol/l～2μmol/l。

4.根据权利要求2所述的一种用于肺孢子菌检测的试剂组合物，其特征在于，所述ssdna报告分子5′和3′末端的荧光基团分别为6-羧基荧光素和荧光淬灭剂bhq1。

5.一种如权利要求1所述用于肺孢子菌检测的crrna在肺孢子菌检测中的应用。

6.一种如权利要求2所述用于肺孢子菌检测的试剂组合物在肺孢子菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱卫东，曾昊，王婷，刘骐铭，徐雪婷，
申请(专利权)人：陕西科技大学，
类型：发明
国别省市：