一种提高皮肤修复功能的重组人源化胶原蛋白的制备方法技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及一种提高皮肤修复功能的重组人源化胶原蛋白的制备方法，包括以下步骤：步骤一、筛选优化细胞穿膜肽；步骤二、菌种构建：将筛选后的细胞穿膜肽通过柔性连接子一连接到胶原蛋白序列两端，构建毕赤酵母表达体系；步骤三、蛋白质表达纯化；本发明专利技术制得的重组人源化胶原蛋白具有良好的透皮能力，大大提高了组织修复效果，其修复抗皱性能显著优于动物来源的胶原蛋白，解决了大分子重组胶原蛋白透皮吸收困难的问题，且所得重组人源化胶原蛋白的组织修复能力及抗皱作用进一步在皮肤细胞中得到了验证，提示了其抗皮肤衰老的潜力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药，具体涉及一种提高皮肤修复功能的重组人源化胶原蛋白的制备方法。

技术介绍

1、胶原蛋白是一种丰富的蛋白质，广泛存在于哺乳动物的皮肤、骨骼、肌肉等组织中，是细胞外基质的主要成分之一。它不仅为组织提供结构支持，还参与细胞的增殖、分化、迁移和信号传递等生理生化过程，对组织的修复和保护起着重要作用。目前，胶原蛋白的研究和应用正在不断深入，科学家们正在探索其更多的生物学功能和临床应用，同时也在改进胶原蛋白的生产方法，以满足不断增长的市场需求。未来，胶原蛋白作为一种生物相容性好、生物可降解的生物材料，有望在组织工程和再生医学中发挥更大的作用。

2、现有技术中，胶原蛋白的来源物种多样，容易存在抗原引起敏感，并且通过提取获得的胶原蛋白，片段不均一，分子量不等，产品质量难以保证。现有的重组法生产的胶原蛋白是大分子生物活性物质，其本身不易透皮吸收，特别是其对真皮层的修复效果十分有限，美容效果还有待提高，而小分子胶原肽存在胶原活性低的问题，因此市场需要高胶原活性和高组织修复性能的重组胶原蛋白。

技术实现思路<本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种提高皮肤修复功能的重组人源化胶原蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的提高皮肤修复功能的重组人源化胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤一中的绿色荧光蛋白标记胶原蛋白表达载体包括柔性连接子二。

3.根据权利要求1所述的提高皮肤修复功能的重组人源化胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤一中添加细胞穿膜肽序列的方法为：采用循环PCR插入突变的方法将不同的细胞穿膜肽序列分别添加到胶原蛋白COL-GFP蛋白序列的N端或C端。

4.根据权利要求2或3所述的提高皮肤修复功能的重组人源化胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述柔...

【技术特征摘要】

1.一种提高皮肤修复功能的重组人源化胶原蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的提高皮肤修复功能的重组人源化胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤一中的绿色荧光蛋白标记胶原蛋白表达载体包括柔性连接子二。

3.根据权利要求1所述的提高皮肤修复功能的重组人源化胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤一中添加细胞穿膜肽序列的方法为：采用循环pcr插入突变的方法将不同的细胞穿膜肽序列分别添加到胶原蛋白col-gfp蛋白序列的n端或c端。

4.根据权利要求2或3所述的提高皮肤修复功能的重组人源化胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述柔性连接子一为gggs、ggggs、ggggsggggs或gggsgggs，柔性连接子二为gggs、ggggs、ggggsggggs或gggsgggs。

5.根据权利要求1所述的提高皮肤修复功能的重组人源化胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤一中的表达和纯化带有细胞穿膜肽序列的融合col蛋白的原核表达载体方法为：构建原核表达载体经一步法转化大肠杆菌bl21(de3)感受态细胞；挑取单菌落，接种于5ml kan的lb培养液中，过夜培养后按1:100扩大，培养至od600为0.5-0.6时，加入终浓度为1mmol/l的iptg活性诱导剂，18℃诱导培养12h；4℃、5000×g条件下离心5min，收集菌液，每200ml培养液所得细菌沉淀以10ml结合缓冲液重悬，所述结合缓冲液包括20mm的tris-hcl和150mm的nacl，并通过hcl调节ph至7.4；冰上超声裂解细菌细胞，4℃、10000×g条件下离心20m...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘宁，吕宏博，
申请(专利权)人：山东美瑞生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：