一种采用毕赤酵母表达噬菌体裂解酶的转化方法技术

本发明专利技术提供了一种采用毕赤酵母表达噬菌体裂解酶的转化方法，属于基因工程技术领域。该方法通过对噬菌体裂解酶的编码基因TL根据毕赤酵母密码子偏好性进行优化与设计，通过酶切链接构建重组表达载体，再将其导入毕赤酵母细胞中形成重组酵母表达菌株，将已鉴定和筛选的高拷贝数阳性转化子通过诱导表达获得活性较高、表达量较大的裂解酶。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程，特别是一种采用毕赤酵母表达噬菌体裂解酶的转化方法。

技术介绍

1、在20世纪80年代，毕赤酵母被开发为使用强且严格调控的aox1启动子的异源蛋白质表达系统。该系统的核心组成部分是aox基因家族，其中包括aox1和aox2，在甲醇存在的情况下，这些基因的转录被诱导并最终产生大量的aox酶。在毕赤酵母表达系统中，当生物体受到甲醇诱导时，aox1和aox2基因被激活，导致其编码的甲醇氧化酶大量表达。这种表达机制使得毕赤酵母表达系统在甲醇存在的条件下能够高效地产生目标蛋白质。aox1和aox2两种启动子都表现出相似的调控行为，但在表达系统中的作用有所不同。在大多数表达载体中，aox1用于驱动异源蛋白的表达，因为它比aox2强几乎10倍。毕赤酵母在不同环境条件下展现出三种主要的表型。甲醇利用缓慢型(muts)是指通过敲除aox1基因导致毕赤酵母在甲醇上的生长速度明显减慢的表型。相反，甲醇利用阳性(mut+)表型指的是敲除aox2基因后，毕赤酵母在甲醇上的生长速度与野生型相当。而甲醇利用负[mut-]型则是通过敲除这两个基因后，导致毕赤酵母无法本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种采用毕赤酵母表达噬菌体裂解酶的转化方法，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的采用毕赤酵母表达噬菌体裂解酶的转化方法，其特征在于：所述步骤(1)中，构建重组载体pPIC9K-TLL的具体方法为：将噬菌体裂解酶TLL基因片段通过特异性引物进行扩增后，同时使用限制性内切酶EcoR I和Not I对噬菌体裂解酶TLL基因片段和pPIC9K载体进行双酶切，使用T4 DNA连接酶将噬菌体裂解酶TLL基因与双酶切后的pPIC9K载体进行连接，构建重组载体pPIC9K-TLL。

3.根据权利要求1所述的采用毕赤酵母表达噬菌体裂解酶的转化方法，其特征在于：所述步骤(1)...

【技术特征摘要】

1.一种采用毕赤酵母表达噬菌体裂解酶的转化方法，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的采用毕赤酵母表达噬菌体裂解酶的转化方法，其特征在于：所述步骤(1)中，构建重组载体ppic9k-tll的具体方法为：将噬菌体裂解酶tll基因片段通过特异性引物进行扩增后，同时使用限制性内切酶ecor i和not i对噬菌体裂解酶tll基因片段和ppic9k载体进行双酶切，使用t4 dna连接酶将噬菌体裂解酶tll基因与双酶切后的ppic9k载体进行连接，构建重组载体ppic9k-tll。

3.根据权利要求1所述的采用毕赤酵母表达噬菌体裂解酶的转化方法，其特征在于：所述步骤(1)中，对重组载体ppic9k-tll进行线性化的方法为：利用限制性内切酶sac i对重组表达载体ppic9k-tll酶切，37℃下孵育4h以完成反应，随后通过1.5％的琼脂糖凝胶进行电泳分析，设置电泳条件为135v，持续30min。

4.根据权利要求1所述的采用毕赤酵母表达噬菌体裂解酶的转化方法，其特征在于：所述步骤(1)中，pcr扩增时使用的特异性引物为5’-gaattc...

【专利技术属性】
技术研发人员：张汉泽，王冉，孙利厂，束忠涛，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：