匀质化肠道类器官制备方法技术

本发明专利技术提供了一种匀质化肠道类器官制备方法，包含如下步骤：基于人多能干细胞的中‑内胚层共分化、中内胚层混合物分化为含造血祖细胞的原始消化管中后侧衍生物、衍生物消化分散与3D再聚合、形成巨噬细胞包含型结肠类器官、以及连续传代扩增。本方法显著降低了结肠类器官个体间的形态表型差异及分子表型差异，有助于推进该新型人源模型的标准化进程，为大范围研究与应用提供基础支撑。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及诱导多能性干细胞，尤其是涉及一种匀质化肠道类器官制备方法。

技术介绍

1、随着干细胞生物学与组织工程学的快速发展，基于人多能干细胞（humanpluripotent stem cells，hpsc）的类器官体外构建技术取得了一系列突破：hpsc源的脑、心、肝、胰、肠等不同类器官系统陆续被成功开发。除具备人源遗传背景的优势外，一方面，这些类器官可通过psc源源不绝的通过诱导分化产生，克服了样本来源问题。另一方面，hpsc类器官往往含有丰富的细胞类型和结构特征，可于体外复现很多器官特异性的生理功能。与传统2d细胞模型相比，在生理相关性上的巨大优势使其在疾病模拟、药效筛选、再生修复等应用场景凸显重要价值。然而，以发育信号的体外驱动作为技术底座，hpsc类器官的生产制备往往面临分化阶段多、制备周期长、操作参数复杂等问题。中间产物的随机性造成了类器官个体之间的表型差异，限制了该技术的体系标准化及进一步转化应用。

技术实现思路

1、有鉴于此，本专利技术旨在提供一种匀质化肠道类器官制备方法，通过将中间产物酶解本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种匀质化肠道类器官制备方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的匀质化肠道类器官制备方法，其特征在于：S1中，含有ROCK抑制剂的培养基还包括VEGF、SCF、FGF4和Wnt/β-CAT激活剂；

3.根据权利要求2所述的匀质化肠道类器官制备方法，其特征在于：在含有ROCK抑制剂的培养基中，VEGF浓度为10-20ng/ml，SCF浓度为5-15ng/ml，FGF4浓度为250-500ng/ml，Wnt/β-CAT激活剂的浓度可以为1-5μM。

4.根据权利要求2所述的匀质化肠道类器官制备方法，其特征在于：在培养基4a和培养...

【技术特征摘要】

1.一种匀质化肠道类器官制备方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的匀质化肠道类器官制备方法，其特征在于：s1中，含有rock抑制剂的培养基还包括vegf、scf、fgf4和wnt/β-cat激活剂；

3.根据权利要求2所述的匀质化肠道类器官制备方法，其特征在于：在含有rock抑制剂的培养基中，vegf浓度为10-20ng/ml，scf浓度为5-15ng/ml，fgf4浓度为250-500ng/ml，wnt/β-cat激活剂的浓度可以为1-5μm。

4.根据权利要求2所述的匀质化肠道类器官制备方法，其特征在于：在培养基4a和培养基4b中，bmp2的浓度为50-150ng/ml，egf的浓度为50-150ng/ml，wnt/β-cat激活剂的浓度为2-4μm，bmp抑制剂的浓度为100-250nm，vegf的浓度为10-20ng/ml，m-csf的浓度为10-20ng/ml；st...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴迪，王莉莉，
申请(专利权)人：淇嘉科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：