【技术实现步骤摘要】
技术介绍
0、背景
1、crispr(成簇规律间隔短回文重复序列)是见于细菌和古细菌的基因组中的含有多个短正向重复序列的基因座。crispr rna(crrna)与crispr相关(cas)效应蛋白缔合以形成识别外来核酸的crispr-cas系统。crispr系统是细菌和古细菌的适应性免疫系统的一部分，通过以序列依赖性方式裂解外来dna来保护它们对抗侵袭性核酸诸如病毒。免疫性通过在crispr基因座的近端在两个邻近重复序列之间整合侵袭性dna的称为间隔子的短片段来获得。crispr阵列在后续与侵袭性核酸相遇期间被转录，并且被加工成长度是约40nt的小干扰crispr rna(crrna)，其与反式活化crispr rna(tracrrna)缔合以将crispr相关核酸酶引导至侵袭性核酸。crispr/cas9效应物复合物裂解侵袭性dna中称为原间隔子的同源性双链dna序列。裂解的先决条件是在靶标dna的下游存在保守原间隔子邻近基序(pam)，对于cas9，所述基序通常具有序列5′-ngg-3′，但较不常见地具有序列nag。...
【技术保护点】
1.一种重组核酸，其包含可操作地连接于编码氨基酸序列如SEQ ID NO:209所示的CRISPR相关转座酶的多核苷酸的异源性启动子。
2.如权利要求1所述的重组核酸，其中所述CRISPR相关转座酶由与选自由SEQ ID NO:86、2445-2449和3125-3129组成的组的序列具有至少90％同一性的核苷酸序列编码。
3.如权利要求1所述的重组核酸，其进一步包含至少一个编码能够与靶标序列杂交的引导RNA的多核苷酸，其中所述引导RNA与所述CRISPR相关转座酶形成复合物。
4.如权利要求3所述的重组核酸，其中所述至少一个编码引...
【技术特征摘要】
1.一种重组核酸，其包含可操作地连接于编码氨基酸序列如seq id no:209所示的crispr相关转座酶的多核苷酸的异源性启动子。
2.如权利要求1所述的重组核酸，其中所述crispr相关转座酶由与选自由seq id no:86、2445-2449和3125-3129组成的组的序列具有至少90％同一性的核苷酸序列编码。
3.如权利要求1所述的重组核酸，其进一步包含至少一个编码能够与靶标序列杂交的引导rna的多核苷酸，其中所述引导rna与所述crispr相关转座酶形成复合物。
4.如权利要求3所述的重组核酸，其中所述至少一个编码引导rna的多核苷酸可操作地连接于第二启动子。
5.如权利要求1所述的重组核酸，其进一步包含至少一个编码供体多核苷酸的多核苷酸。
6.如权利要求5所述的重组核酸，其中所述至少一个编码供体多核苷酸的多核苷酸可操作地连接于第二启动子。
7.如权利要求1所述的重组核酸，其中编码所述crispr相关转座酶的所述多核苷酸进一步编码至少一个核定位信号(nls)。
8.一种载体，其包含如权利要求1-7中任一项所述的重组核酸。
9.一种不可再生的真核细胞，其包含如权利要求1-7中任一项所述的重组核酸。
10.一种用于对靶标核酸序列进行序列特异性修饰的非天然存在的系统，其包含(a)一个或多个引导rna或编码所述一个或多个引导rna的dna分子，其中所述一个或多个引导rna能够与所述靶标核酸序列杂交，和(b)氨基酸序列如seq id no:209所示的crispr相关转座酶或编码所述crispr相关转座酶的多核苷酸，其中所述一个或多个引导rna和所述crispr相关转座酶不一起天然存在。
11.如权利要求10所述的系统，其中编码所述crispr相关转座酶的所述多核苷酸包含与选自由seq id no:86、2445-2449和3125-3129组成的组的核苷酸序列具有至少90％同一性的核苷酸序列。
12.如权利要求10所述的系统，其中所述靶标核酸序列包含编码核酸序列、非编码核酸序列、或编码核酸序列和非编码核酸序列的组合。
13.如权利要求10所述的系统，其中所述靶标核酸序列包含内源性基因或转基因。
14.如权利要求10所述的系统，其中所述系统包含二价阳离子。
15.如权利要求10所述的系统，其中(a)所述引导rna或编码所述引导rna的dna分子提供在第一核酸分子上，并且编码所述crispr相关转座酶的所述多核苷酸提供在第二核酸分子上，或(b)所述引导rna或编码引导rna的dna分子和编码所述crispr相关转座酶的所述多核苷酸提供在单一核酸分子上。
16.如权利要求10所述的系统，其中所述引导rna呈经分离的rna的形式，或在载体中编码，并且其中所述载体是病毒载体、质粒载体或土壤杆菌属载体。
17.如权利要求10所述的系统，其进一步包含供体多核苷酸。
18.如权利要求17所述的系统，其中所述供体多核苷酸包含编码核酸序列、非编码核酸序列、或编码核酸序列和非编码核酸序列的组合。
19.如权利要求17所述的系统，其中所述供体多核苷酸包含启动子。
20.如权利要求17所述的系统，其中所述供体多核苷酸包含一个或多个转基因。
21.如权利要求10所述的系统，其中所述crispr相关转座酶包含一个或多个核定位信号。
22.如权利要求10所述的系统，其中所述靶标序列在细胞内。
23.如权利要求22...
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