巨噬细胞包含型结肠类器官批量制备方法技术

本发明专利技术提供了一种巨噬细胞包含型结肠类器官批量制备方法，包含如下步骤：基于人多能干细胞的中‑内胚层共分化、中内胚层混合物分化为含造血祖细胞的原始消化管中后侧衍生物、机械破碎与3D包被培养、形成巨噬细胞包含型结肠类器官以及传代扩增。本发明专利技术将巨噬细胞包含型结肠类器官的得率提升了约7倍；并在维持其表型稳定的前提下，实现了类器官的体外连续扩增，使显著降低成本、增加产能。本发明专利技术将有助于快速推动该新型人源模型的大范围研究与应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及诱导多能性干细胞，尤其是涉及一种巨噬细胞包含型结肠类器官批量制备方法。

技术介绍

1、随近10年来干细胞生物学与组织工程学的快速发展，基于人多能干细胞（humanpluripotent stem cells，hpsc）的类器官诱导分化技术取得了一系列突破：hpsc源的脑、肝、肺、肠等类器官系统分别被成功建立。除人源性优势外，一方面，这些类器官可通过psc源源不断产生，解决了样本来源的限制性问题。另一方面，hpsc源类器官往往具备丰富的细胞类型和结构特征，可于体外重现许多器官特异性的生理功能。与传统2d细胞模型相比，在生理相关性上的巨大优势使其在病理解析、药物筛选、毒性评价、发育研究等方面凸显重要价值，逐渐成为科学研究与药物开发的新一代模型工具。然而，现阶段的hpsc源类器官尚面临技术流程长、产率低、成本高等问题，限制了广泛应用的潜力。目前，psc源结肠类器官的产率主要依赖于中间产物—原始消化管中后侧衍生物的产生效率。这些结肠始祖细胞以3d球体的形式，随分化的进行而零散地悬浮于下层2d细胞之上。如何提升该中间产物的得率是hpsc源结肠类器官降本本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种巨噬细胞包含型结肠类器官批量制备方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的巨噬细胞包含型结肠类器官批量制备方法，其特征在于：S1中机械破碎的具体方法包括如下步骤：

3.根据权利要求1所述的巨噬细胞包含型结肠类器官批量制备方法，其特征在于：S2中，在培养基3a中预培养1-2天。

4.根据权利要求1所述的巨噬细胞包含型结肠类器官批量制备方法，其特征在于：BMP2的浓度为50-150ng/ml，EGF的浓度为50-150ng/ml，Wnt/β-CAT激活剂的浓度为2-4μM，BMP抑制剂的浓度为100-250nM，VEGF的浓度...

【技术特征摘要】

1.一种巨噬细胞包含型结肠类器官批量制备方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的巨噬细胞包含型结肠类器官批量制备方法，其特征在于：s1中机械破碎的具体方法包括如下步骤：

3.根据权利要求1所述的巨噬细胞包含型结肠类器官批量制备方法，其特征在于：s2中，在培养基3a中预培养1-2天。

4.根据权利要求1所述的巨噬细胞包含型结肠类器官批量制备方法，其特征在于：bmp2的浓度为50-150ng/ml，egf的浓度为50-150ng/ml，wnt/β-cat激活剂的浓度为2-4μm，bmp抑制剂的浓度为100-250nm，vegf的浓度为10-20ng/ml，m-c...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴迪，王莉莉，尹云飞，
申请(专利权)人：淇嘉科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：