一种表达N-糖基化重组蛋白的工程菌株及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种表达N‑糖基化重组蛋白的工程菌株及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明专利技术将四糖合成基因与pEcgRNA‑N20质粒共同转入含有pEcCas质粒的大肠埃希菌感受态细胞中，挑取阳性单克隆，消除仅含有pEcgRNA‑N20质粒和pEcCas质粒的重组菌，得到重组工程菌，本发明专利技术的构建方法简单易行、效率高，所得到的重组工程菌株W3110删除lacZ位点同时整合入lsgCDEF基因簇以构建类人源化四糖链合成代谢途径，转入了携带糖基化受体蛋白基因的质粒，可用于N‑糖基化重组蛋白的表达。该方法可在大肠埃希菌体内快速实施，稳定性好，为其他模块化途径提供了技术平台。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程，特别涉及一种表达n-糖基化重组蛋白的工程菌株及其构建方法和应用。

技术介绍

1、大肠埃希菌于1885年首次被分离和描述，是哺乳动物结肠中无处不在的“居民”，也是研究得最好的模式生物之一。大肠杆菌因其快速生长和成熟的工程技术而成为代谢工程广泛使用的平台，因其具有易于进行基因水平上的操作、遗传背景清楚、培养成本低等优点一直作为表达外源基因的首选，也成为很多研究者们进行糖蛋白生产的选择。目前常用的工程菌大肠埃希菌主要来自于菌株k-12和b。虽然大肠埃希菌本身体内不存在糖基化途径，但在2002年，wacker等将空肠弯曲杆菌(campylobacter jejuni,c.jejuni)来源的pgl基因簇及目的蛋白acra转移至大肠埃希菌并检测到了糖蛋白的表达，证实了寡糖基转移酶pglb在糖基化过程中的重要作用，由此在大肠埃希菌中工程化生产糖蛋白成为可能，也为大批量生产n-糖基化修饰的治疗性蛋白药物和糖蛋白疫苗开辟了新的道路。

2、w3110是k-12的衍生菌株，消除了f和lambda，是一种经过较少改造的野生型大肠杆菌菌株且相对本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种含有四糖合成基因的靶基因片段，其特征在于，所述的基因的核苷酸序列如SEQID NO.1所示。

2.一种携带权利要求1所述的基因的重组质粒。

3.一种包含权利要求2所述的重组质粒的重组工程菌。

4.根据权利要求3所述的重组工程菌，其特征在于，所述重组工程菌为大肠埃希菌。

5.根据权利要求4所述的重组工程菌，其特征在于，所述大肠埃希菌为大肠埃希菌W3110。

6.一种重组工程菌的构建方法，将权利要求1所述的含有四糖合成基因的靶基因片段与pEcgRNA-N20质粒共同转入含有pEcCas质粒的大肠埃希菌感受态细胞中，挑取阳性单...

【技术特征摘要】

1.一种含有四糖合成基因的靶基因片段，其特征在于，所述的基因的核苷酸序列如seqid no.1所示。

2.一种携带权利要求1所述的基因的重组质粒。

3.一种包含权利要求2所述的重组质粒的重组工程菌。

4.根据权利要求3所述的重组工程菌，其特征在于，所述重组工程菌为大肠埃希菌。

5.根据权利要求4所述的重组工程菌，其特征在于，所述大肠埃希菌为大肠埃希菌w3110。

6.一种重组工程菌的构建方法，将权利要求1所述的含有四糖合成基因的靶基因片段与pecgrna-n20质粒共同转入含有peccas质粒的大肠埃希菌感受态细胞中，挑取阳性单克隆，消除仅含有pecgrna-n20质粒和peccas质粒的重组菌，得到重组工程菌。...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁宁，高玉亭，胡学军，宋钇潼，吴宇航，吴琼，张小梅，郑洋，
申请(专利权)人：大连大学，
类型：发明
国别省市：