本发明专利技术公开了一种基于EDC调控的单个CRISPR‑Cas12a系统建立肺炎克雷伯菌毒力基因双重检测方法，属于生物传感器检测技术领域，包括建立EDC反应体系、CRISPR‑Cas12a反应体系和EDC调控CRISPR‑Cas12a系统双重检测hvKp毒力基因检测体系，本研究EDC反应根据不同的靶标释放不同的荧光探针，进而调控CRISPR‑Cas12a的反式切割活性达到双重检测的目的。此外，通过引入ssRNA Fuel有效避免了CRISPR‑Cas12a对底物的非特异性切割，实现了单管一体式检测。该检测方法在反应25min左右时便可以检测到rmpA、peg‑344的mRNA，检测水平接近fM，达到了快速检测的目的。同时，该方法也能够准确的识别出rmpA、peg‑344两种特异性靶标序列，展示出了良好的特异性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物传感器检测，具体为一种基于edc调控的单个crispr-cas12a系统建立肺炎克雷伯菌毒力基因双重检测方法。
技术介绍
1、肺炎克雷伯菌可分为经典肺炎克雷伯菌(classic klebsiella pneumoniae,ckp)和高毒力型肺炎克雷伯菌。ckp主要在免疫功能低下或存在皮肤面膜屏障破坏的宿主中引起感染。而hvkp引发的感染大多数为社区获得性，可在健康个体中引起高侵袭性感染，是化脓性肝脓肿的主要原因，通常伴有弥散性多部位感染，包括眼内炎、尿道炎以及脑膜炎等。hvkp的毒力基因主要存在于毒力质粒上，可在菌株之间进行水平传播。碳青霉烯耐药高毒力肺炎克雷伯菌(carbapenemase resistant hypervirulent klebsiella pneumoniae,cr-hvkp)是通过毒力质粒和耐药质粒在同一菌株中同时出现或通过携带这两种基因的杂交质粒形成的，成为新一代的“超级细菌”，给临床诊治带来极大的挑战。因此，加强高毒力肺炎克雷伯菌的快速、准确的检测对有效的治疗和预防控制至关重要。
>2、hvkp菌株的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于EDC调控的单个CRISPR-Cas12a系统建立肺炎克雷伯菌毒力基因双重检测方法，其特征是：包括建立EDC反应体系、CRISPR-Cas12a反应体系和EDC调控CRISPR-Cas12a系统双重检测hvKp毒力基因检测体系；
2.根据权利要求1所述的基于EDC调控的单个CRISPR-Cas12a系统建立肺炎克雷伯菌毒力基因双重检测方法，其特征是：
3.根据权利要求1所述的基于EDC调控的单个CRISPR-Cas12a系统建立肺炎克雷伯菌毒力基因双重检测方法，其特征是：所述CRISPR-Cas12a反应体系包括：利用荧光验证EDC反应释放的ssDNA...
【技术特征摘要】
1.一种基于edc调控的单个crispr-cas12a系统建立肺炎克雷伯菌毒力基因双重检测方法，其特征是：包括建立edc反应体系、crispr-cas12a反应体系和edc调控crispr-cas12a系统双重检测hvkp毒力基因检测体系；
2.根据权利要求1所述的基于edc调控的单个crispr-cas12a系统建立肺炎克雷伯菌毒力基因双重检测方法，其特征是：
3.根据权利要求1所述的基于edc调控的单个crispr-cas12a系统建立肺炎克雷伯菌毒力基因双重检测方法，其特征是：所述crispr-cas12a反应体系包括：利用荧光验证edc反应释放的ssdna产物激活cas12a反式切割活性的可行性。
4.根据权利要求1、2或3所述的基于edc调控的单个crispr-cas12a系统建立肺炎克雷伯菌毒力基因双重检测方法，其特征是：所述edc反应体系、crispr-cas12a反应体系和edc联合crispr-cas12a系统双重检测hvkp毒力基因检测体系中使用的crrna的序列设计为与edc1和edc2中trigger链序列互补。
5.根据权利要求2所述的基于edc调控的单个crispr-cas12a系统建立肺炎克雷伯菌毒力基因双重检测方法，其特征是：所述优化edc探针包括：
6.根据权利要求2所述的基于edc调控的单个crispr-cas12a系统建立肺炎克雷伯菌毒力基因双重检测方法，其特征是...
【专利技术属性】
技术研发人员：许永杰，杨晓武，詹琳，查艳，罗洁，胡方芳，张华，龙文巧，
申请(专利权)人：贵州省人民医院，
类型：发明
国别省市：
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