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一种大环糊精的制备方法技术

技术编号:4209497 阅读:350 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
一种大环糊精的制备方法,属于食品工业技术领域。本发明专利技术从土豆淀粉中提取得到直链淀粉;然后用4-α-糖基转移酶作用直链淀粉生产大环糊精,并对制备的大环糊精进行了初步纯化及鉴定。本发明专利技术制备的大环糊精经鉴定聚合度范围为18-55之间,在国内首次制备得到了大环糊精,并且为大环糊精在工业中应用提供了技术依据。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种大环糊精的制备方法,其特征在于,以土豆直链淀粉为底物,经4-α-糖基转移酶作用、复合酶综合处理得到聚合度范围为18-55的大环糊精,步骤为:    1)土豆直链淀粉的提取:称取10.0g土豆淀粉,加入少量无水乙醇浸润,加入370mL的0.5mol/L氢氧化钠溶液,并置于沸水中加热30min,溶液分散均匀后冷却,低速离心除去不溶物,用2mol/L的盐酸调节pH至中性,加入200mL体积比为3∶1的正丁醇-异戊醇的混合液,在沸水中水浴20-30min,使溶液清澈透明,无结团状,冷却至室温,于2-4℃的冰箱中放置24h,取出,进行如下操作:以6000转/min离心20min,将沉淀物全部转移至120mL的正丁醇与水的体积比为1∶9的正丁醇水溶液中,然后置于沸水浴中搅拌直至溶液分散透明,再逐渐冷却至室温,放入2-4℃的冰箱中24h,取出,离心,将得到的沉淀物重复所述操作共3次后,用无水乙醇浸泡5-6次,并于室温下真空干燥得到土豆直链淀粉;    2)大环糊精的制备:称取土豆直链淀粉4g,加入90%的二甲亚砜100mL,沸水浴中加热使其溶解;向该淀粉体系中加入pH7.5,0.05mol/L  Tris-HCl缓冲溶液30mL,并调节溶液pH为7.5;加入40U/mL的4-α-糖基转移酶纯酶液4mL,于75℃下反应8h,沸水浴中加热20min终止反应;4℃、10000转/min离心10min后收集反应液,向反应液中加入30U/g淀粉的β-淀粉酶去除未反应的直链淀粉,30℃反应4h后沸水浴加热10min终止反应;离心去除沉淀后再加入100U/mL的糖化酶和30U/mL的脱支酶各2mL,50℃反应6h后沸水浴加热10min终止反应,4℃、10000转/min离心10min后收集上清,加入无水乙醇使得乙醇质量浓度达到60%,10000转/min离心10min收集沉淀,将沉淀冻干即得经过初步纯化的大环糊精;    3)产物的鉴定:用高效阴离子色谱HPAEC对大环糊精样品进行鉴定,操作如下:    称取0.01g大环糊精样品,用超纯水溶解至1mL制成10mg/mL的样品溶液,上样10μL,采用的色谱条件是:Carbo  PacTM  PA-200column  3*250mm;柱温为30℃;流速为0.5mL/min;检测器采用电化学检测器;洗脱条件采用醋酸钠梯度洗脱法,程序如下:0-5min醋酸钠浓度达到70mmol/L,氢氧化...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:王金鹏徐学明金征宇谢正军田耀旗
申请(专利权)人:江南大学
类型:发明
国别省市:32[中国|江苏]

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