一种杜氏肌营养不良症PTC小鼠模型的构建方法及其应用技术

一种杜氏肌营养不良症PTC小鼠模型的构建方法及其应用，属于动物模型制备技术领域。本发明专利技术一方面提供了一种杜氏肌营养不良症PTC小鼠模型的构建方法，另一方面提供了该小鼠模型的用途。本发明专利技术利用CRISPR/Cas9技术，在小鼠Dmd基因特定位点分别引入TAG和TGA‑PTC突变，提前终止Dystrophin蛋白表达，诱导发生杜氏肌营养不良症。本发明专利技术还提供了该杜氏肌营养不良症小鼠模型的评估方法。该模型有助于阐明TAG和TGA‑PTC突变在杜氏肌营养不良症发生发展过程中的机制，从而推动针对不同PTC突变引起的杜氏肌营养不良症药物的开发。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于动物模型制备，具体涉及一种杜氏肌营养不良症ptc小鼠模型的构建方法及其应用。

技术介绍

1、提前终止密码子(premature termination codon，ptc)疾病是一类由基因突变引起的遗传性疾病，这些突变可能包括点突变、小的插入或缺失，导致原有的三核苷酸密码子变为终止密码子(uaa、uag或uga)。这种改变使得mrna在翻译过程中提前终止，不能合成全长的蛋白质，从而导致蛋白质功能丧失或减弱。据统计，在所有由人类基因突变引起的疾病中，约有11％的病例是由ptc突变引起的(mort et al.,2008)。由于蛋白质功能的缺失，该类疾病通常表现为进行性发展，患者最终会因器官衰竭等问题在年轻时死亡。

2、杜氏肌营养不良症(duchenne muscular dystrophy，dmd)就是一种典型的ptc疾病。它是由x染色体上的肌营养不良蛋白基因(dystrophin基因或dmd基因)发生无义突变引起的，导致肌营养不良蛋白的缺失或功能异常。dmd基因编码的肌营养不良蛋白是一种巨大的蛋白质，位于肌肉细胞的细胞膜上，其功能本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种杜氏肌营养不良症PTC小鼠模型的构建方法，其特征在于，利用CRISPR-Cas9系统将小鼠Dmd基因23号外显子上编码995位谷氨酰胺的三个碱基由CAA突变为TAG或TGA。

2.如权利要求1所述的一种杜氏肌营养不良症PTC小鼠模型的构建方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

3.如权利要求1或2所述的一种杜氏肌营养不良症PTC小鼠模型的构建方法，其特征在于，还包括利用引物鉴定小鼠基因型的步骤，所述鉴定小鼠基因型使用的引物序列如SEQID NO.6和SEQ ID NO.7所示。

4.如权利要求3所述的一种杜氏肌营养不良症PTC小鼠模型的构建方法，...

【技术特征摘要】

1.一种杜氏肌营养不良症ptc小鼠模型的构建方法，其特征在于，利用crispr-cas9系统将小鼠dmd基因23号外显子上编码995位谷氨酰胺的三个碱基由caa突变为tag或tga。

2.如权利要求1所述的一种杜氏肌营养不良症ptc小鼠模型的构建方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

3.如权利要求1或2所述的一种杜氏肌营养不良症ptc小鼠模型的构建方法，其特征在于，还包括利用引物鉴定小鼠基因型的步骤，所述鉴定小鼠基因型使用的引物序列如seqid no.6和seq id no.7所示。

4.如权利要求3所述的一种杜氏肌营养不良症ptc小鼠模型的构建方法，其特征在于，还包括对该小鼠模型进行dystrophin蛋白检测、血液生化指标检测、组织病理学检查和行为学实验分析。

5.如权利要求4所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡林桢，李庆，林世贤，
申请(专利权)人：苏州嵌化合生医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：