利用四唑蓝法快速测定发光细菌活细菌总数制造技术

本发明专利技术的目的是建立一种快速测定发光细菌活细菌总数的方法，特别是一种基于ＭＴＴ显色原理的活细菌计数方法。本发明专利技术采用ＭＴＴ比色法测定发光细菌活菌数，通过对ＭＴＴ比色法的检测条件进行了优化选择。确定最佳的测定发光细菌活细菌总数的方法。本发明专利技术首先将ＭＴＴ和活菌体内琥珀酸脱氢酶反应生成的产物ｆｏｒｍａｚａｎ溶于ＤＭＳＯ后，在４００ｎｍ一８００ｎｍ范围内测定光吸收值，确定检测的最大吸收波长为５００ｎｍ。通过优化时间、温度对吸光值的影响，确定最佳的测定条件为：反应时间２ｈ，反应温度２５℃。本发明专利技术检测原理新颖，检测方法简便快速，重复性好，可适用于食品卫生与安全、环境检测等领域发光细菌活细胞数量的定量检测。同时可应用于微生物学、免疫学以及其他学科的实验中，作为活细菌材料活性和数量的测定。本发明专利技术还可发展成为细菌总数测定的方法，用于替代传统的测定活体细胞总数的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种快速测定发光细菌活细菌总数的方法，特别是一种基于MTT显色原理的活细菌计数方法。
技术介绍
据本专利技术人通过査阅资料、文献检索所知目前，在微生物学、免疫学以及其他学科的实验中，常用一定浓度的活细菌作为实验材料，这就涉及 到一个活菌计数的问题。微生物学常用的几种细菌计数方法有比浊法、平板计数法等。比浊法操作方法简 单但只能测量细菌数量，不能判断细菌的活性；平板计数法虽然测量的是活菌数，但方法繁琐，重复性较差，所需时间长，在菌落计数时容易造成误差。四唑蓝(tetrazoliumsalt，MTT)比色法是一种于1983年首创用于检测细胞生长和存活的新方法。其原 理是活细胞内的琥珀酸脱氢酶可将MTT(淡黄色)还原成蓝紫色的formazan，而且形成的量与活细胞数量成 正比关系。此方法具有简单、快速、灵敏、稳定的特点，克服了常规方法的不足之处。近年来，在体外药 敏试验、细胞增殖、细胞毒性和活性测定等方面有诸多的应用。已成为哺乳动物细胞活性测定的基本方法， 具有快速、简便、准确、避免使用同位素等优点。目前尚未有将MTT法应用于发光细菌活细菌总数测定的相关报道。
技术实现思路
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【技术保护点】
一种快速测定发光细菌活细菌总数的方法，其特征是：　（１）基于ＭＴＴ显色的原理；　（２）测定波长为５００ｎｍ；　（３）测定温度为２５℃；　（４）反应时间为２ｈ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王静雪，林洪，王亚群，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]