一种细胞内蛋白质折叠状态的测定方法技术

本发明专利技术提供了一种细胞内蛋白质折叠状态的测定方法，属于定量蛋白质组学测定技术领域。本发明专利技术先在收集细胞后加入非特异性蛋白酶，然后冷冻研磨，离心过滤后收集滤液和蛋白质，蛋白质进一步使用特异性酶胰蛋白酶进行酶解，接着使用质谱分析上述过滤液中非特异性蛋白酶降解的蛋白质肽段以及胰蛋白酶酶解的肽段，最后定量分析蛋白质的折叠组分以及未折叠的蛋白质区域。本发明专利技术的测定方法简单快速，不需要对蛋白进行纯化或荧光标记，即可实现细胞内大规模蛋白质折叠状态的质谱测定，在蛋白质错误折叠引起的疾病和药物筛选中具有良好的应用空间和潜力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及定量蛋白质组学测定，尤其涉及一种细胞内蛋白质折叠状态的测定方法。

技术介绍

1、蛋白质的三级结构(tertiary structure)是指多肽链中所有原子和基团的构象。它是在二级结构的基础上进一步盘曲折叠形成的，包括所有主链和侧链的结构。由于蛋白质异常的三维空间结构可以引发多种“折叠病”，如疯牛病、亨廷顿舞蹈症、老年性痴呆症、囊性纤维病变、家族性高胆固醇症、家族性淀粉样蛋白症、肿瘤、白内障等等。因此，“蛋白质折叠”问题被生物科学家列为“21世纪生物物理学”的重要前沿课题。随着实验技术的快速发展，过去难以在分子水平上的生命活动研究得以开展。核磁共振技术(nmr)可在秒到皮秒的时间域上观察不同温度和压力下蛋白质的折叠和去折叠过程，其中包括主链和侧链的运动，然而nmr仍然存在着核磁信号峰重叠严重、谱线较宽、分辨率较低、质量较大的蛋白质复合物分析困难、所需蛋白量大等问题；冷冻电镜虽然以较高的分辨率直接分析蛋白质复合物的精细结构，可是存在着仪器价格昂贵、表征通量低等不足；氢氘交换质谱可在单个氨基酸分辨率水平上监测蛋白质的结构及其动态变化，是研究蛋白质本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种细胞内蛋白质折叠状态的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述非特异性酶包括嗜热菌蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶或蛋白酶K。

3.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述非特异性酶与细胞的质量比为1:5～50。

4.根据权利要求3所述的测定方法，其特征在于，所述标记定量采用SILAC、TMT或iTRAQ。

5.根据权利要求4所述的测定方法，其特征在于，所述二次酶解使用的酶包括胰蛋白酶。

6.根据权利要求5所述的测定方法，其特征在于，二次酶解时使用的酶与所述蛋白质的质量比为1:...

【技术特征摘要】

1.一种细胞内蛋白质折叠状态的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述非特异性酶包括嗜热菌蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶或蛋白酶k。

3.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述非特异性酶与细胞的质量比为1:5～50。

4.根据权利要求3所述的测定方法，其特征在于，所述标记定量采用silac、tmt或itraq。

5.根据权利要求4所述的测定方法，其特征在于，所述二次酶解使用的酶包括胰蛋白酶。

6.根据权利要求5所述的测定方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵樑，赵婷，孙振兴，马拯，
申请(专利权)人：天津市肿瘤医院天津医科大学肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：