一种用于靶向敲除鸡TRIM45基因的sgRNA、TRIM45敲除细胞系及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于靶向敲除鸡TRIM45基因的sgRNA、TRIM45敲除细胞系及其应用，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明专利技术设计了一种特异性靶向TRIM45第一个外显子的sgRNA，通过CRISPR‑Cas9技术成功敲除鸡成纤维细胞TRIM45基因。通过检测蛋白和mRNA表达都证实敲除细胞构建成功，虽然TRIM45敲除细胞的形态未发生明显变化，但接触抑制能力明显减弱，首次获得稳定传代的TRIM45敲除的鸡源细胞系。本发明专利技术构建的TRIM45敲除细胞系，在不同感染那时间点均显著增强了ALV‑J复制水平，能够用于提高未来ALV‑J疫苗的抗原表达量。本发明专利技术构建的TRIM45敲除细胞系，也能够显著抑制IBDV的复制水平，是具有IBDV抗性表型的细胞系，为IBDV的致病机制研究和抗病毒育种提供生物材料。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程，具体涉及一种用于靶向敲除鸡trim45基因的sgrna、trim45敲除细胞系及其应用。

技术介绍

1、crispr(clustered regularly interspersed short palindromic repeats)是原核生物的基因组内的一段重复序列，广泛存在于40％的已测序细菌和90％的古细菌中。cas基因位于crispr基因附近或分散于基因组其他处，所编码的cas蛋白能够与crispr序列共同作用。其中，crispr-cas9系统属于ii型crispr-cas系统被广泛用于基因编辑领域；crispr-cas9包括tar-crrna序列区、cas基因序列区和crispr序列区。当噬菌体首次侵入细菌时，cas基因编码蛋白识别入侵dna的pam区域，将其原型间隔序列裂解并将其整合到dna的crispr序列5′端。当相同噬菌体再次入侵，crispr序列在前导区的调控下转录产生pre-crrna，同时产生与pre-crrna互补的tar-crrna。两者相互结合形成双链rna并与cas9编码的蛋白组装为复合体。根据间隔本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于靶向敲除鸡TRIM45基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一种用于靶向敲除鸡TRIM45基因的双链DNA，其特征在于，所述双链DNA的上游序列如SEQ ID NO.5所示，双链DNA的下游序列如SEQ ID NO.6所示。

3.一种包含权利要求1所述的sgRNA或权利要求2所述的双链DNA的载体。

4.一种包含权利要求3所述的载体的细胞。

5.一种TRIM45敲除细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

6.根据权利要求5所述的TRIM45敲除细胞系的构建方...

【技术特征摘要】

1.一种用于靶向敲除鸡trim45基因的sgrna，其特征在于，所述sgrna的核苷酸序列如seq id no.2所示。

2.一种用于靶向敲除鸡trim45基因的双链dna，其特征在于，所述双链dna的上游序列如seq id no.5所示，双链dna的下游序列如seq id no.6所示。

3.一种包含权利要求1所述的sgrna或权利要求2所述的双链dna的载体。

4.一种包含权利要求3所述的载体的细胞。

5.一种trim45敲除细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

6.根据权利要求5所述的trim45敲除细胞系的构建方法，其特征在于，步骤(3)中使用的pcr引物序列如seq id no.7～8所示。

...

【专利技术属性】
技术研发人员：王佳兴，陈世豪，常国斌，刘宗平，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：