生产胶原酶的改进方法技术

本发明专利技术涉及胶原酶生产和胶原酶产物的领域，特别涉及提高胶原酶I和胶原酶II组合物的再现性、纯度和稳定性，其中所述组合物经反相高压液相色谱(RP‑HPLC)测量的纯度以面积计为至少95％，并且本质上不含中性蛋白酶。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及胶原酶生产和胶原酶产物的领域，特别涉及提高胶原酶i和胶原酶ii组合物的再现性、纯度和稳定性，其中所述组合物经反相高压液相色谱(rp-hplc)测量的纯度以面积计为至少95％，并且本质上不含中性蛋白酶。

技术介绍

1、先前在美国专利第7,811,560号中已经描述了一种用于从溶组织梭菌的发酵物中制造高纯度(至少95％的纯度)胶原酶的工艺。胶原酶i和ii是分解胶原的酶，所述胶原是哺乳动物中最大量的结构蛋白。这些酶用于治疗多种胶原介导的疾病，例如，杜普伊特伦挛缩、佩罗尼氏病、脂肪瘤和粘连性关节囊炎。美国专利第6,086,872号和第5,589,171号公开了使用胶原酶制剂治疗杜普伊特伦疾病。美国专利第6,022,539号公开了使用胶原酶制剂治疗佩罗尼氏病。美国专利第6,958,150号和第7,842,673号公开了使用胶原酶用于治疗脂肪瘤。美国专利申请公开第2006/020448a1号公开了使用胶原酶治疗粘连性关节囊炎。美国专利申请公开号第2014/0335072号和第2016/0279046号公开了使用胶原酶用于治疗脂肪团。</p>

2、胶原本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种组合物，其包括从发酵的溶组织梭菌中分离和纯化的胶原酶I和胶原酶II，其中所述胶原酶I和胶原酶II是通过反相高压液相色谱法(RP-HPLC)测量的纯度以面积计为至少95％，并且其中所述组合物包括每毫克胶原酶少于1000纳克的中性蛋白酶，其是通过具有或不具有光密度测定法的酪蛋白酶谱法测量的。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物包括每毫克胶原酶少于100纳克、少于75纳克、少于50纳克或少于25纳克的中性蛋白酶。

3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述组合物不含可检测量的中性蛋白酶。

4.根据权利要求1-3所述的组合物，其中所述胶原酶I...

【技术特征摘要】

1.一种组合物，其包括从发酵的溶组织梭菌中分离和纯化的胶原酶i和胶原酶ii，其中所述胶原酶i和胶原酶ii是通过反相高压液相色谱法(rp-hplc)测量的纯度以面积计为至少95％，并且其中所述组合物包括每毫克胶原酶少于1000纳克的中性蛋白酶，其是通过具有或不具有光密度测定法的酪蛋白酶谱法测量的。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物包括每毫克胶原酶少于100纳克、少于75纳克、少于50纳克或少于25纳克的中性蛋白酶。

3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述组合物不含可检测量的中性蛋白酶。

4.根据权利要求1-3所述的组合物，其中所述胶原酶i和胶原酶ii以近似1：1的质量比存在。

5.一种组合物，其包括从发酵的溶组织梭菌中分离和纯化的胶原酶i，其中所述胶原酶i是通过反相高压液相色谱法(rp-hplc)测量的纯度以面积计为至少95％，并且其包括每毫克胶原酶i少于1000纳克的中性蛋白酶，其是通过具有或不具有光密度测定法的酪蛋白酶谱法测量的。

6.根据权利要求5所述的组合物，其中所述组合物包括每毫克胶原酶i中少于100纳克、少于75纳克、少于50纳克或少于25纳克的中性蛋白酶。

7.根据权利要求5或6所述的组合物，其中所述组合物包括不含可检测量的中性蛋白酶。

8.一种组合物，其包括从发酵的溶组织梭菌中分离和纯化的胶原酶ii，其中所述胶原酶ii是通过反相高压液相色谱法(rp-hplc)测量的纯度以面积计为至少95％，并且其包括每毫克胶原酶ii少于约1000纳克的中性蛋白酶，其是通过具有或不具有光密度测定法的酪蛋白酶谱法测量的。

9.根据权利要求8所述的组合物，其中所述组合物包括每毫克胶原酶ii中少于100纳克、少于75纳克、少于50纳克或少于25纳克的中性蛋白酶。

10.根据权利要求8或9所述的组合物，其中所述组合物不含可检测量的中性蛋白酶。

11.一种从发酵的溶组织梭菌中分离和纯化胶原酶的方法，其包括：

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述盐选自由硫酸铵、氯化钠、氯化钾、硫酸钠或其混合物组成的群组。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述盐为硫酸铵。

14.根据权利要求11-13中任一权利要求所述的方法，其中所述胶原酶包括胶原酶i，并且所述方法包括从中性蛋白酶中分离出胶原酶i的馏分。

15.根据权利要求11-14中任一权利要求所述的方法，其中所述胶原酶包括胶原酶ii，并且所述方法包括从中性蛋白酶中分离出胶原酶ii的馏分。

16.根据权利要求15所述的方法，进一步包括混合所述高纯度的所述胶原酶i和胶原酶ii馏分，其中每毫克混合物具有小于50纳克的中性蛋白酶。

17.根据权利要求11-16中任一权利要求所述的方法，进一步包括在低水平的金属的存在下纯化所述胶原酶，所述低水平的金属选自由铝、砷、钙、镉、铬、铜、铁、镁和铅组成的群组。

18.根据权利要求11-17中任一权利要求所述的方法，其中所述镍是以以下量存在：小于1.0ppm、小于0.9ppm、小于0.8ppm、小于0.7ppm、小于0.6ppm、小于0.5ppm、小于0.4ppm、小于0.3ppm、小于0.2ppm、小于0.1ppm、小于0.09ppm、小于0.08ppm、小于0.07ppm、小于0.06ppm、小于0.05...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·A·谢弗，M·伯鲍姆，J·汉娜，J·德齐艾道斯，D·沙纳费尔特，
申请(专利权)人：恩多风投有限公司，
类型：发明
国别省市：