【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，属于生物
技术介绍
罗布麻是夹竹桃科(^wc戸acefle)罗布麻属0;wQ7mm)的一种多年生宿根草 本植物，它包括罗布红麻(J/WQ7wm vewe^m Zi/m)和罗布白麻C4;wc)7mm Ae^rw/foo)t./.)。罗布麻无论在纤维利用、药用还是保健品开发方面均具有 极高的综合利用价值。国内外现有的报道主要是关于罗布麻纤维脱胶技术的研 究，而对前期的育种、生长特性和如何提高麻纤维质量的研究报道很少。由于罗 布麻分枝较多，既影响种植密度，也难于实现机械化剥麻，直接影响了纤维长度 和产量。野生资源已经远远无法满足不断增长的市场需求。目前，虽然进行了一 些小规模人工种植试验，但分枝多，纤维短及产量低的问题仍然无法解决。因此， 通过现代生物工程技术，利用转基因育种方法减少罗布麻的分枝，培育出分枝少、 纤维产量高的新品种，提高麻皮的质量和产量，不但在控制植物分枝研究方面具 有重要意义，而且所选育新品种的推广将会产生巨大的社会和经济效益。虽然目前对于其它植物的分枝发育调控国内外已有较多研究，但分枝控制涉 及到十分复杂的植物激素调控和...
【技术保护点】
一种通过基因沉默控制罗布麻分枝的方法，其特征是： （１）．罗布麻分枝调控基因ＣＵＣ３保守区的克隆； 应用ＲＴ－ＰＣＲ方法，提取罗布麻总ＲＮＡ反转录产生ｃＤＮＡ，以ｃＤＮＡ为模板克隆分枝调控基因ＣＵＣ３保守区基因片段，并根据反义ＲＮＡ基因沉默原理构建反义表达载体； ＣＵＣ３基因片段的克隆：从罗布麻无菌种子苗中制备总ＲＮＡ，通过反转录反应产生ｃＤＮＡ第一链，再以ｃＤＮＡ第一链为模板进行ＲＴ－ＰＣＲ反应，根据Ｇｅｎｅｂａｎｋ中收录的ＣＵＣ３基因保守区的序列设计１对兼并引物，其序列为： Ｐｒｉｍｅｒ１：５′－ＡＴＴＡＣＴ／ＣＴＴＴ／ＣＴＡＣＴＴＡＧＣＴＴＣＣＡＡＡＡ／Ｇ－３′； Ｐ...
【技术特征摘要】
1. 一种通过基因沉默控制罗布麻分枝的方法，其特征是(1). 罗布麻分枝调控基因CUC3保守区的克隆；应用RT-PCR方法，提取罗布麻总RNA反转录产生cDNA，以cDNA为模板克隆分枝调控基因CUC3保守区基因片段，并根据反义RNA基因沉默原理构建反义表达载体；CUC3基因片段的克隆从罗布麻无菌种子苗中制备总RNA，通过反转录反应产生cDNA第一链，再以cDNA第一链为模板进行RT-PCR反应，根据Genebank中收录的CUC3基因保守区的序列设计1对兼并引物，其序列为Primer15′-ATTACT/CTTT/CTACTTAGCTTCCAAAA/G-3′；Primer25′-CCTTTGTAGAAC/AACC/AAA/GC/TGTC/TTTCTTC-3′(2). 基因沉默载体的构建；将RT-PCR的目的产物片段插入克隆载体pEASY-T1，然后进行DNA序列分析，测序结果与Genebank中序列进行同源性比较；将测序正确的CUC3基因片段用XbaI和SacI从pEASY-T1切下，反向插入含有35S启动子和NOS终止子的表达载体pCAMBIA-1301，构建成反义表达载体pCAMBIA-1301-CUC3；(3). 通过发根农杆菌介导的方法进行基因转移；采用冻融法将反义表达载体pCAMBIA1301-CUC3导入发根农杆菌，涂布含卡那霉素(50-100mg/L)的YEB平板后，在28℃恒温培养箱，培养2天后，挑取单菌落，用PCR方法进行检测，检测为阳性的克隆用于感染罗布麻真叶、茎、子叶节，子叶，下胚轴，根等不同外植体部位；(4). 罗布麻的转化和转基因植株再生；用导入反义表达载体的发根农杆菌感染罗布麻上述不同外植体部位，感染后的外植体在黑暗条件下共培养2天，然后转至含有500mg/L头孢霉素的MS培养基，25±1℃，14h/10h光/暗培养，每隔5-7天转接一次，共转接3-5次，感染后约7-10天产生毛状根，待毛状根长至2-3cm，用PCR方法进行检测，将检测为阳性的根切下转至50mg/L卡那霉素和300mg/L头孢霉素的芽诱导培养基上进行筛选，待筛选到的芽长至2-3cm高时，转入生根培养基，经过2-3周培养，转化植株生根并长成完整再生植株；(5). 转基因植株的检测和筛选；对转基因植株采取三步法筛选，第一步，通过采用PCR和South...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵兵，贾海燕，王晓东，
申请(专利权)人：中国科学院过程工程研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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