一种基于RPA-Cas12a的油菜黑胫病快速检测方法技术

本发明专利技术属于分子生物学检测技术领域，具体涉及一种基于RPA‑Cas12a的油菜黑胫病的快速检测方法，包括以下步骤：提取待测样品的基因组DNA；利用RPA上下游引物进行靶标基因的RPA扩增反应，得到RPA扩增产物；利用RPA扩增产物、Cas12a蛋白、crRNA及核酸探针建立RPA‑Cas12a检测体系，反应后得到RPA‑Cas12a反应产物，通过荧光检测法或试纸条检测法进行鉴定。本发明专利技术提供的检测方法，具备稳定性强、灵敏度高和适合现场快速检测等特点，对油菜黑胫病菌近缘种或亚种都能很好的区分，避免了假阳性的产生。同时提供了基于无毒基因的油菜黑胫病的监测技术，便于抗性品种的种植，延缓病原菌入侵大面积危害。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学检测，具体涉及一种基于rpa-cas12a的油菜黑胫病快速检测方法。

技术介绍

1、油菜黑胫病是一种危害十字花科植物的世界性病害，其病原是小球腔菌属(leptosphaeria)的两种近缘真菌，即斑点小球腔菌(leptosphaeria maculans,lm)和双球小球腔菌(leptosphaeria biglobosa,lb)，为便于检疫，我国在2009年将高毒力的斑点小球腔菌(l.maculans)引起的病害命名为油菜茎基溃疡病，并列为检疫性病害。

2、斑点小球腔菌(l.maculans)侵染油菜，还危害白菜、甘蓝和芥菜等近30种十字花科植物，引起茎基溃疡、植株倒伏和死亡，是世界范围内广泛分布的一种严重危害油菜产业的病原菌，具有高毒力和侵略性，l.maculans造成的产量损失约10％～20％，发生严重时可达30％～50％甚至更高。全世界每个生长季节的损失估计超过9亿美元。经济分析预测，通过执行严格的检疫程序将推迟流行病的开始，节省数十亿美元。因此加强检疫和监管是控制该l.maculans病菌传入的重要手段。因此，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于RPA-Cas12a的油菜黑胫病快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于，所述靶标基因为油菜黑胫病病原菌的actin基因。

3.根据权利要求2所述的快速检测方法，其特征在于，

4.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于，所述靶标基因为油菜黑胫病病原菌的无毒基因，所述无毒基因为AvrLm2、AvrLm(4-7)、AvrLm(5-9)、AvrLm6或AvrLm11；

5.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于，提取待测样品的基因组DNA的具体操作过程为：取疑似发病组织，加...

【技术特征摘要】

1.一种基于rpa-cas12a的油菜黑胫病快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于，所述靶标基因为油菜黑胫病病原菌的actin基因。

3.根据权利要求2所述的快速检测方法，其特征在于，

4.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于，所述靶标基因为油菜黑胫病病原菌的无毒基因，所述无毒基因为avrlm2、avrlm(4-7)、avrlm(5-9)、avrlm6或avrlm11；

5.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于，提取待测样品的基因组dna的具体操作过程为：取疑似发病组织，加入te缓冲液充分研磨，放入定量滤纸或whatmanno.1滤纸，充分吸收研磨液后转移至洗涤缓...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴明德，曹艺，李国庆，杨龙，张静，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：