一种真核细胞内促进蛋白质翻译系统的质粒及其构建方法和应用技术方案

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及一种真核细胞内促进蛋白质翻译系统的质粒及其构建方法和应用。本发明专利技术中质粒包括SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示碱基序列的tgRNA。本发明专利技术中蛋白质过表达体系的关键质粒构建方法包括：寻找基因编码上游58bp处长度为22bp序列；将序列与BoxB序列相连之后并构建相应引物；质粒酶切形成线性化载体；引物退火后形成双链与线性化载体连接构建重组质粒。本发明专利技术通过促进翻译起始复合物形成在翻译水平促进蛋白质表达，通过不断优化该系统得出能够促进靶基因表达的最佳组合方式。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药，具体涉及一种真核细胞内促进蛋白质翻译系统的质粒及其构建方法和应用。

技术介绍

1、传统的基因过表达体系主要集中于通过外源性转导高效率启动子连接目的基因编码序列上调细胞内目的基因mrna表达水平，这种方式虽然能够起到稳定的基因过表达的目的，但是需要通过设计引物在细胞基因组中钓取目的基因dna片段，然后将其连接至基因表达载体上，然后通过质粒转染达到目的基因过表达的目的。

2、目前，crispr技术的广泛应用使得基因编辑技术得到了质的飞跃，通过crispr-dcas9-vp64质粒通过grna靶向基因启动子区能够促进此基因的转录，最终发生基因过表达。此方法能够有效减少实验成本，但在实际应用过程中仍有不足，转录后修饰过程同样会调控目的基因的表达，因此促进细胞内基因转录过程并不一定能够上调基因表达，通过促进基因转录过程产生更多的mrna，其后续翻译过程受到影响仍然可能导致基因的过表达失败。

3、因此，开发了一个能够在翻译水平过表达某种蛋白质，在极低的mrna水平下做到上调蛋白质表达的系统具有重大意义。

本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于真核细胞内促进蛋白质翻译系统的tgRNA，其特征在于，所述tgRNA包括SEQID NO:1和SEQ ID NO:2所示碱基序列。

2.根据权利要求1所述的tgRNA，其特征在于，所述tgRNA还包括SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示碱基序列的反向互补序列。

3.根据权利要求1所述的tgRNA，其特征在于，所述tgRNA包括GFP基因转录起始位点上游-58至-36位置的碱基序列。

4.一种真核细胞内促进蛋白质翻译系统的质粒，其特征在于，所述质粒包括权利要求1-3任一项所述的tgRNA。

5.根据权利要求4所述的质粒...

【技术特征摘要】

1.一种用于真核细胞内促进蛋白质翻译系统的tgrna，其特征在于，所述tgrna包括seqid no:1和seq id no:2所示碱基序列。

2.根据权利要求1所述的tgrna，其特征在于，所述tgrna还包括seq id no.1和seq idno.2所示碱基序列的反向互补序列。

3.根据权利要求1所述的tgrna，其特征在于，所述tgrna包括gfp基因转录起始位点上游-58至-36位置的碱基序列。

4.一种真核细胞内促进蛋白质翻译系统的质粒，其特征在于，所述质粒包括权利要求1-3任一项所述的tgrna。

5.根据权利要求4所述的质粒，其特征在于，所述质粒还包括nes序列、hur序列、λn-eif4e1融合蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄凯，刘俊哲，李婧滢，祝新根，
申请(专利权)人：南昌大学第二附属医院，
类型：发明
国别省市：