Cas9蛋白、含有Cas9蛋白的基因编辑系统及应用技术方案

本发明专利技术属于基因编辑技术领域，具体涉及一种CRISPR/Cas9基因编辑系统以及其应用。本发明专利技术基因编辑系统为特定Cas9蛋白与sgRNA形成的复合体，能精确定位靶向DNA序列并产生切割，使所述靶序列发生双链断裂损伤；所述基因编辑为在细胞中或体外进行基因编辑。所述各Cas9蛋白均具有数量相对少的氨基酸，可与相同的sgRNA形成复合体进行基因编辑。进一步地，所述Sa‑SchCas9蛋白和SchCas9蛋白识别的PAM序列非常简单，所述Sha2Cas9‑HF1蛋白、Sha2Cas9‑HF2蛋白、SpeCas9‑HF1蛋白、SpeCas9‑HF2蛋白和SpeCas9‑HF3蛋白特异性非常高且编辑效率很高。本发明专利技术在基因编辑领域中具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本申请属于基因编辑，具体涉及cas9蛋白、含有该cas9蛋白的基因编辑系统及其相关应用。

技术介绍

1、crispr/cas9系统是细菌和古细菌为抵御外源病毒或质粒入侵而进化的一种获得性免疫系统。crispr/cas9系统含有tracrrna(trans-activating rna)和crrna(crispr-derived rna)，它们和cas9共同形成复合物发挥功能。tracrrna和crrna通过连接序列可以融合成为单链单链向导rna(single guide rna，sgrna)。当dna发生断裂损伤后，细胞内的两种主要dna损伤修复机制负责修复：非同源末端连接(non-homologous end-joining，nhej)和同源重组(homologous recombination，hr)。nhej修复的结果会引起碱基的缺失或插入，可以进行基因敲除；在提供同源模板的情况下，利用hr修复可以进行基因的定点插入和碱基的精确替换。

2、除了基础科研外，crispr/cas9基因编辑系统还具有广泛的临床应用前景。利用crispr/cas本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种Cas9蛋白，所述Cas9蛋白为氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的Sha2Cas9-HF1蛋白；氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示的Sha2Cas9-HF2蛋白；或氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示的Sha2Cas9-R247A蛋白。

2.一种缀合物，所述缀合物包含：

3.一种融合蛋白，所述融合蛋白包含：

4.一种分离的核酸分子，所述分离的核酸分子包含编码以下的核酸序列：

5.根据权利要求4所述的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子还包含编码单链向导RNA的核酸序列，所述单链向导RNA包括支架序列，所述支架序列为：<...

【技术特征摘要】

1.一种cas9蛋白，所述cas9蛋白为氨基酸序列如seq id no:7所示的sha2cas9-hf1蛋白；氨基酸序列如seq id no:8所示的sha2cas9-hf2蛋白；或氨基酸序列如seq id no:9所示的sha2cas9-r247a蛋白。

2.一种缀合物，所述缀合物包含：

3.一种融合蛋白，所述融合蛋白包含：

4.一种分离的核酸分子，所述分离的核酸分子包含编码以下的核酸序列：

5.根据权利要求4所述的分离的核酸分子，其中所述分离的核酸分子还包含编码单链向导rna的核酸序列，所述单链向导rna包括支架序列，所述支架序列为：

6.一种载体，所述载体包含编码以下的核酸序列：

7.根据权利要求6所述的载体，其中，所述载体进一步包含编码单链向导rna的核酸序列，所述单链向导rna包括支架序列，所述支架序列为...

【专利技术属性】
技术研发人员：王永明，王帅，高思琪，王瑶，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：