参与非洲猪瘟病毒感染的宿主因子及抗病靶标应用制造技术

本发明专利技术公开了参与非洲猪瘟病毒感染的宿主因子及抗病靶标应用，在非洲猪瘟病毒高度易感、遗传背景清晰的猪源LLC‑PK1细胞系中，基于猪全基因组CRISPR/Cas9敲除文库筛选到参与非洲猪瘟病毒感染的WDR91基因。进一步，分别利用CRISPR/Cas9技术和siRNA方式在LLC‑PK1或猪原代肺泡巨噬细胞（PAMs）中，完全敲除或者降低WDR91基因的表达能够显著抑制非洲猪瘟病毒在宿主细胞内的复制。本发明专利技术提供的WDR91基因能够作为抵抗非洲猪瘟病毒复制的靶点，用于防治由非洲猪瘟病毒感染引发的疾病。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于动物抗病育种，具体涉及宿主因子wdr91作为抵抗非洲猪瘟病毒感染的关键抗病靶标。

技术介绍

1、非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(african swine fever，asfv)引起的一种高度接触性动物传染病，所有品种和年龄的猪均可感染，发病率和死亡率高可达100％。

2、目前，研究中应用的非洲猪瘟病毒易感细胞主要为猪原代肺泡巨噬细胞(pam)。然而，受原代细胞分离程序复杂，不同取样个体间存在遗传差异等因素影响，降低了研究的准确性，限制了病毒感染和asf致病机制的研究进程。筛选鉴定asfv易感的猪源细胞系不仅能够克服原代细胞遗传差异的不足，而且能够极大简化研究手段，是非洲猪瘟病毒研究领域的重要一环。目前，已经报道了wsl、ma104、ipkm、vero、cv-1和cos-1等多种不同物种来源的、能够被非洲猪瘟病毒感染的传代细胞系，但是这些细胞受限于人为改造，或非猪源细胞，或病毒感染不能够致死等因素，并未被广泛应用。病毒的增殖需要依赖于宿主细胞，研究证明非洲猪瘟病毒感染宿主细胞会引发宿主基因表达模式的改变，为自身增殖、扩散创造有利条件。利本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.猪WDR91基因抑制剂的用途，其特征在于，用于制备预防或治疗非洲猪瘟病毒感染的药物。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述猪WDR91基因抑制剂包括RNAi干扰WDR91蛋白表达的siRNA，或基因编辑靶向敲除猪WDR91基因的核酸分子或其表达载体。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述siRNA的靶向序列为5’-AGACAAACAGAAATGACAATT-3’。

4.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，采用CRISPR/Cas9技术靶向敲除猪WDR91基因的sgRNA的序列为5’-GCTGGACGCCGAGATCAAGG-3...

【技术特征摘要】

1.猪wdr91基因抑制剂的用途，其特征在于，用于制备预防或治疗非洲猪瘟病毒感染的药物。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述猪wdr91基因抑制剂包括rnai干扰wdr91蛋白表达的sirna，或基因编辑靶向敲除猪wdr91基因的核酸分子或其表达载体。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述sirna的靶向序列为5’-agacaaacagaaatgacaatt-3’。

4.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，采用crispr/cas9技术靶向敲除猪wdr91基因的sgrna的序列为5’-gctggacgccgagatcaagg-3’。

5.用于制备预防或治疗非洲猪瘟病毒感染的药物，其特征在于，包括靶向敲除猪wdr91基因的核酸分子，或干扰wdr91蛋白表达的sirna。...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢胜松，赵书红，刘海龙，李新云，郭子实，彭贵青，孙丽蒙，郭一霖，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：