胰岛素和十四酰化ＰＫＣα伪底物用于制备皮肤创伤愈合的药物组合物的用途制造技术

一种用于诱导或加速损伤的皮肤或皮肤创伤的愈合过程的药物组合物，所述药物组合物包括，作为活性成分的治疗有效量的胰岛素和至少一种与所述胰岛素协同作用的其它试剂，以及适合于所述药物组合物局部施用的药学可接受的载体。一种用于诱导或加速损伤的皮肤或皮肤创伤的愈合过程的方法，所述方法包括对损伤的皮肤或皮肤创伤施用治疗有效量的胰岛素和至少一种与所述胰岛素协同作用的其它试剂以诱导或加速损伤的皮肤或皮肤创伤的愈合过程。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于愈合创伤的方法和药物组合物专利
和背景本专利技术涉及一种用于诱导和/或加速细胞增殖和/或细胞分化并因此而加速创伤(wounds)的愈合过程的方法和药物组合物。更具体而言，本专利技术涉及经调节的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，也称为PKC的表达和/或活化，例如由膜运输和活化引起的，用于诱导和/或加速细胞增殖和/或细胞分化和/或细胞迁移从而加速创伤的愈合过程的用途。根据本专利技术的教导，这种表达的调节可以通过下述作用实现：(i)用PKC表达构建体转化创伤细胞；(ii)用顺式作用元件转化创伤细胞，该元件将被插入到创伤细胞内源PKC基因上游邻近位置；(iii)给予胰岛素以诱导创伤细胞中PKC的表达和/或活化；(iv)用胰岛素表达构建体转化创伤细胞，其产生的表达的和分泌的胰岛素可作为PKC的表达和/或活化的上调剂；(v)用顺式作用元件转化创伤细胞，该元件将被插入到创伤细胞内源胰岛素基因上游邻近位置，被表达和分泌的胰岛素可作为PKC的表达和/或活化的上调剂；(vi)向创伤中植入胰岛素分泌细胞；(vii)用反式作用因子，例如PDX1转化创伤细胞，以诱导内源胰岛素产生和分泌，所述胰岛素可作为PKC的表达和/或活化的上调剂；以及(viii)给创伤施用PKC调节剂。本专利技术正如任何上述方法所实现的那样，也可离体实施，以产生皮肤移植物。创伤治疗最主要的目的是使创伤闭合。张开的皮肤创伤代表了一类主要的创伤，包括烧伤，神经性溃疡，褥疮性溃疡，静脉淤滞性溃疡，和糖尿病性溃疡。张开的皮肤创伤通常经过这样的过程愈合，包括六个主要要素：(i)发炎；(ii)成纤维细胞增殖；(iii)血管增殖；(iv)结缔组织合成；(v)形成上皮；和(vi)创伤收缩。当这些要素，无论是单独的还是作为整体，不能正确发挥作用的时候，则破坏了创伤的愈合。有多种因素都可以影响创伤愈合，包括营养不良，感染，药理学试剂(例如放线菌素和类固醇)，高龄和糖尿病[参见Hunt and Goodson，Current Surgical Diagnosis & Treatment (Way；Appleton &-->Lange)，pp.86-98(1988)]。就糖尿病而言，糖尿病的特征就在于胰岛素信号传导(signaling)受到损伤，血浆葡萄糖升高，以及在几种特定组织上发生慢性的并发症的易感性。在所有糖尿病的慢性并发症中，导致足部溃烂的受损的创伤愈合是研究最少的。然而糖尿病患者的皮肤溃疡花费了大量人力和财力(29，30)。而且，足部溃烂以及而后的下肢截断是最常见的糖尿病患者住院的原因(30-33)。在糖尿病中，创伤愈合过程受到破坏，愈合的创伤的特征在于伤口强度减小。组织修复的缺陷与几种因素有关，包括神经病，血管病和感染。但是，尚不明了其它机制，通过该机制，与胰岛素信号传导异常相关的糖尿病状态破坏创伤的愈合并改变皮肤生理。还有一个普遍存在的问题是身体的各个部分的外科手术之后的创伤愈合，手术成功但是创伤切口不愈合。皮肤是分层的鳞状的上皮，其中正在进行生长和分化的细胞被严格隔开。在生理状态，增殖只限于附着于基底膜上的基底细胞。分化是一种空间过程，其中基底细胞失去与基底膜的附着，停止DNA合成并经历一系列形态学的和生物化学的变化。最终的成熟步骤是产生角质层，其形成皮肤的保护屏障(1，2)。在基底细胞开始分化的时候观察到的最早的变化与基底细胞从基底膜分离和迁移的能力有关(3)。创伤的愈合过程也有类似的变化，其中细胞迁移到创伤部位，增殖能力也增加。这些过程是皮肤层的重建和诱导表皮层正确分化所必需的。小鼠和人角质化细胞培养系统的开发大大方便了对表皮细胞生长和分化调节机制的分析(2，4)。在体外，角质化细胞可以保持为具有高生长速度的基底增殖细胞。而且，遵循表皮在体内的成熟模式可以在体外诱导分化。早期事件包括半桥粒组分的丧失(3，5)和α6β4整联蛋白的选择性丧失以及细胞与基质蛋白的附着的选择性丧失。这表明整联蛋白表达的变化是角质化细胞分化中的早期事件。早期的半桥粒接触(hemidesmosomal contact)的丧失导致角质化细胞向基底层上迁移，并且与培养的角质化细胞中以及皮肤中角蛋白1(K1)的诱导有关(1，3，6)。向颗粒层表型的进一步分化与β1和β4整联蛋白的表达的下调，与所有基质蛋白的附着潜力的丧失有关，然后就是角-->质化包膜的形成和细胞死亡。分化细胞最终从培养皿上脱落成为成熟鳞屑(2，7)。这种体外分化过程是严格遵循体内表皮成熟模式进行的。最近对于角质化细胞生物学的研究突出了蛋白激酶C(ProteinKinase C)途径的贡献，其调节皮肤增殖和分化。丝氨酸-苏氨酸激酶的蛋白激酶C(PKC)家族在多种生物现象中都起着重要的调节作用(8，9)。PKC家族由至少12个单独的同种型(isoform)构成，其属于3个不同的类别：(i)传统同种型(α，β1，β2，γ)，其被磷脂酶C在胞内释放的Ca2+，佛波酯和二酰甘油激活；(ii)新同种型(δ，ε，η，θ)，其也可以被佛波酯和二酰甘油激活，但不能被Ca2+激活；(iii)家族的非典型性(ζ，λ，ι)成员，其不能被Ca2+，佛波酯或二酰甘油激活。当被激活的时候，大部分但不是所有同种型被认为会从细胞质迁移到质膜上。同种型的类型和分布模式在不同的组织中各不相同，也会随表型而变化。由于PKC在多种激素作用的细胞终点中的重要性，已有多项研究阐明了其结构和功能。在体内和培养物中已识别了皮肤中的五种PKC同种型-α，δ，ε，η和ζ。近来的研究表明PKC信号传导途径是分化反应的主要胞内调节剂(10，11)。而且，PKC的药理学活化剂是体内和体外角质化细胞分化的强有力的诱导剂(4，12)，PKC抑制剂能防止分化标志物的表达(10)。在构思本专利技术时，猜测PKC同种型的过表达和/或活化可能会有助于加速创伤愈合过程。由于难以有效地用传统方法向原代细胞中引入外源基因，因而对各个PKC同种型在皮肤细胞增殖和/或分化中的作用的研究受到了限制。生命期短，存在分化可能以及不能分离到稳定的转化体都使得外源基因不能有效转导入原代皮肤细胞。现有技术描述了胰岛素作为创伤愈合的治疗剂的潜在应用。美国专利5,591,709，5,461,030和5,145,679描述了将胰岛素局部施用于创伤以促进创伤愈合。但是，这些专利所描述的都是将胰岛素和葡萄糖组合使用，因为胰岛素的功能是增加葡萄糖的吸收，因而促进创伤愈合。美国专利申请09/748,466和国际专利申请PCT/US98/21794描述了局部施用于皮肤以促进皮肤健康或治疗较浅的皮肤损伤的含有胰岛-->素的组合物。但是，这些专利申请并没有教导使用胰岛素治疗慢性的，II度(Grade II)或较深的创伤。国际专利申请PCT/US01/10245描述了将氰基丙烯酸酯聚合物密封剂与胰岛素或银组合使用以使创伤愈合。但是，在此申请中既没有教导也没有暗示胰岛素和另一种生物活性试剂组合使用可以调节PKC的表达和/或活化。国际专利申请PCT/US85/00695描述了局部施用胰岛素以治疗糖尿病。但是，该专利申请并没有教导使用胰岛素治疗与糖尿病无关的创伤。国际专利申请PCT/US92\本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种诱导或加速损伤的皮肤或皮肤创伤愈合过程的方法，所述方法包括给所述损伤的皮肤或皮肤创伤施用治疗有效量的胰岛素和至少一种其它与所述胰岛素协同作用的试剂以诱导或加速所述损伤的皮肤或皮肤创伤的所述愈合过程。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2003-7-15 60/486,906;US 2003-8-21 10/644,7751.一种诱导或加速损伤的皮肤或皮肤创伤愈合过程的方法，所述方法包括给所述损伤的皮肤或皮肤创伤施用治疗有效量的胰岛素和至少一种其它与所述胰岛素协同作用的试剂以诱导或加速所述损伤的皮肤或皮肤创伤的所述愈合过程。2.权利要求1的方法，其中所述施用是通过单次施用实现的。3.权利要求1的方法，其中所述治疗有效量的胰岛素具有0.1μM到10μM的胰岛素浓度。4.权利要求1的方法，其中所述至少一种其它试剂是血小板衍生生长因子。5.权利要求1的方法，其中所述至少一种其它试剂是PKC-α抑制剂。6.权利要求1的方法，其中所述皮肤创伤选自溃疡，糖尿病相关的创伤，烧伤，晒伤，老化皮肤创伤，角膜溃烂创伤，炎性胃肠道疾病创伤，肠炎性疾病创伤，克罗恩氏病创伤，溃疡性结肠炎，痔疮，大疱性表面松解症创伤，皮肤起疱创伤，牛皮癣创伤，动物皮肤创伤，动物糖尿病创伤，视网膜病创伤，口腔创伤(粘膜炎)，阴道粘膜炎创伤，牙龈病创伤，裂伤，手术切口创伤和手术后粘连创伤。7.权利要求6的方法，其中所述溃疡选自糖尿病性溃疡，褥疮，静脉溃疡，胃溃疡和HIV相关溃疡。8.权利要求1的方法，其中所述胰岛素是重组的。9.权利要求1的方法，其中所述胰岛素是天然来源的。10.权利要求1的方法，其中所述胰岛素和至少一种其它试剂包含于适合于局部施用的药物组合物中。11.权利要求10的方法，其中所述药物组合物选自水溶液，凝胶，霜剂，糊剂，洗剂，喷雾，悬液，粉末，分散液，油膏剂和软膏剂。12.权利要求10的方法，其中所述药物组合物包括固体支持物。13.一种诱导或加速损伤的皮肤或皮肤创伤愈合过程的方法，所述方法包括向所述损伤的皮肤或皮肤创伤中植入治疗有效量的胰岛素分泌细胞，从而诱导或加速所述损伤的皮肤或皮肤创伤的所述愈合过程。14.权利要求13的方法，其中所述皮肤创伤选自溃疡，糖尿病相-->关的创伤，烧伤，晒伤，老化皮肤创伤，角膜溃烂创伤，炎性胃肠道疾病创伤，肠炎性疾病创伤，克罗恩氏病创伤，溃疡性结肠炎，痔疮，大疱性表面松解症创伤，皮肤起疱创伤，牛皮癣创伤，动物皮肤创伤，动物糖尿病创伤，视网膜病创伤，口腔创伤(粘膜炎)，阴道粘膜炎创伤，牙龈病创伤，裂伤，手术切口创伤和手术后粘连创伤。15.权利要求14的方法，其中所述溃疡选自糖尿病性溃疡，褥疮，静脉溃疡，胃溃疡和HIV相关溃疡。16.权利要求13的方法，其中所述细胞被转化以产生和分泌胰岛素。17.权利要求16的方法，其中所述细胞被重组PDX1基因转化，从而使所述细胞产生和分泌天然胰岛素。18.权利要求16的方法，其中所述细胞被顺式作用元件序列转化，该序列整合到所述细胞的内源胰岛素基因的上游，从而所述细胞产生和分泌天然胰岛素。19.权利要求16的方法，其中所述细胞被重组胰岛素基因转化，从而所述细胞产生和分泌重组胰岛素。20.权利要求13的方法，其中所述胰岛素分泌细胞能够形成分泌颗粒。21.权利要求13的方法，其中所述胰岛素分泌细胞是内分泌细胞。22.权利要求13的方法，其中所述胰岛素分泌细胞是人源的。23.权利要求13的方法，其中所述胰岛素分泌细胞是组织相容性人化动物来源的。24.权利要求13的方法，其中所述胰岛素分泌细胞分泌人胰岛素。25.权利要求13的方法，其中所述胰岛素分泌细胞是自体细胞。26.权利要求13的方法，其中所述细胞选自成纤维细胞，上皮细胞和角质化细胞。27.一种诱导或加速皮肤创伤的愈合过程的方法，所述方法包括转化所述损伤的皮肤或皮肤创伤的细胞以产生和分泌胰岛素，从而诱导或加速所述损伤的皮肤或皮肤创伤的所述愈合过程。28.权利要求27的方法，其中所述创伤选自溃疡，糖尿病相关的创伤，烧伤，晒伤，老化皮肤创伤，角膜溃烂创伤，炎性胃肠道疾病创伤，肠炎性疾病创伤，克罗恩氏病创伤，溃疡性结肠炎，痔疮，大-->疱性表面松解症创伤，皮肤起疱创伤，牛皮癣创伤，动物皮肤创伤，动物糖尿病创伤，视网膜病创伤，口腔创伤(粘膜炎)，阴道粘膜炎创伤，牙龈病创伤，裂伤，手术切口创伤和手术后粘连创伤。29.权利要求28的方法，其中所述溃疡选自糖尿病性溃疡，褥疮，静脉溃疡，胃溃疡和HIV相关溃疡。30.权利要求27的方法，其中所述细胞被重组PDX1基因转化，从而所述细胞产生和分泌天然胰岛素。31.权利要求27的方法，其中所述细胞被顺式作用元件序列转化，该序列整合到所述细胞的内源胰岛素基因的上游，从而所述细胞产生和分泌天然胰岛素。32.权利要求27的方法，其中所述细胞被重组胰岛素基因转化，从而所述细胞产生和分泌重组胰岛素。33.一种诱导或加速皮肤创伤的愈合过程的方法，所述方法包括转化所述皮肤创伤的细胞以产生蛋白激酶C，从而诱导或加速所述损伤的皮肤或皮肤创伤的所述愈合过程。34.权利要求33的方法，其中所述皮肤创伤选自溃疡，糖尿病相关的创伤，烧伤，晒伤，老化皮肤创伤，角膜溃烂创伤，炎性胃肠道疾病创伤，肠炎性疾病创伤，克罗恩氏病创伤，溃疡性结肠炎，痔疮，大疱性表面松解症创伤，皮肤起疱创伤，牛皮癣创伤，动物皮肤创伤，动物糖尿病创伤，视网膜病创伤，口腔创伤(粘膜炎)，阴道粘膜炎创伤，牙龈病创伤，裂伤，手术切口创伤和手术后粘连创伤。35.权利要求34的方法，其中所述溃疡选自糖尿病性溃疡，褥疮，静脉溃疡，胃溃疡和HIV相关溃疡。36.权利要求33的方法，其中所述细胞被转化以产生蛋白激酶C转录活化剂，从而所述细胞产生天然蛋白激酶C。37.权利要求33的方法，其中所述细胞被顺式作用元件序列转化，该序列整合到所述细胞的内源蛋白激酶C的上游，从而所述细胞产生天然的蛋白激酶C。38.权利要求33的方法，其中所述细胞被重组蛋白激酶C基因转化，从而所述细胞产生重组蛋白激酶C。39.权利要求33的方法，其中所述蛋白激酶C选自PKC-β1，PKC-β2，PKC-γ，PKC-θ，PKC-λ，和PKC-ι。-->40.权利要求33的方法，其中所述蛋白激酶C选自PKC-α，PKC-δ，PKC-ε，PKC-η和PKC-ζ。41.一种用于诱导或加速损伤的皮肤或皮肤创伤的愈合过程的药物组合物，所述药物组合物包括，作为活性成分的治疗有效量的胰岛素，至少一种与所述胰岛素协同作用的其它试剂，以及设计用于所述药物组合物局部施用的药学可接受的载体。42.权利要求41的药物组合物，其中所述至少一种其它试剂是生长因子。43.权利要求42的药物组合物，其中所述生长因子是血小板衍生生长因子。44.权利要求41的药物组合物，其中所述至少一种其它试剂是PKC-α抑制剂。45.权利要求41的药物组合物，其中所述胰岛素是重组的。46.权利要求41的药物组合物，其中所述胰岛素是天然来源的。47.权利要求41的药物组合物，其中所述创伤选自溃疡，糖尿病相关的创伤，烧伤，晒伤，老化皮肤创伤，角膜溃烂创伤，炎性胃肠道疾病创伤，肠炎性疾病创伤，克罗恩氏病创伤，溃疡性结肠炎，痔疮，大疱性表面松解症创伤，皮肤起疱创伤，牛皮癣创伤，动物皮肤创伤，动物糖尿病创伤，视网膜病创伤，口腔创伤(粘膜炎)，阴道粘膜炎创伤，牙龈病创伤，裂伤，手术切口创伤和手术后粘连创伤。48.权利要求47的方法，其中所述溃疡选自糖尿病性溃疡，褥疮，静脉溃疡，胃溃疡和HIV相关溃疡。49.权利要求41的药物组合物，其中所述胰岛素和至少一种其它试剂包含于适于局部施用的制剂中。50.权利要求49的药物组合物，其中所述制剂选自水溶液，凝胶，霜剂，糊剂，洗剂，喷雾，悬液，粉末，分散液，油膏剂和软膏剂。51.权利要求50的药物组合物，其中所述药物组合物包括固体支持物。52.一种用于诱导或加速损伤的皮肤或皮肤创伤的愈合过程的药物组合物，所述药物组合物包括，作为活性成分的胰岛素分泌细胞，以及设计用于所述药物组合物局部施用的药学可接受的载体。53.权利要求52的药物组合物，其中所述创伤选自溃疡，糖尿病-->相关的创伤，烧伤，晒伤，老化皮肤创伤，角膜溃烂创伤，炎性胃肠道疾病创伤，肠炎性疾病创伤，克罗恩氏病创伤，溃疡性结肠炎，痔疮，大疱性表面松解症创伤，皮肤起疱创伤，牛皮癣创伤，动物皮肤创伤，动物糖尿病创伤，视网膜病创伤，口腔创伤(粘膜炎)，阴道粘膜炎创伤，牙龈病创伤，裂伤，手术切口创伤和手术后粘连创伤。54.权利要求53的方法，其中所述溃疡选自糖尿病性溃疡，褥疮，静脉溃疡，胃溃疡和HI V相关溃疡。55.权利要求52的药物组合物，其中所述细胞被转化以产生和分泌胰岛素。56.权利要求52的药物组合物，其中所述细胞被重组PDX1基因转化，从而所述细胞产生和分泌天然胰岛素。57.权利要求52的药物组合物，其中所述细胞被顺式作用元件序列转化，该序列整合到所述细胞的内源胰岛素基因的上游，从而所述细胞产生和分泌天然胰岛素。58.权利要求52的药物组合物，其中所述细胞被重组胰岛素基因转化，从而所述细胞产生和分泌重组胰岛素。59.权利要求52的药物组合物，其中所述胰岛素分泌细胞能够形成分泌颗粒。60.权利要求52的药物组合物，其中所述胰岛素分泌细胞是内分泌细胞。61.权利要求52的药物组合物，其中所述胰岛素分泌细胞是人源的。62.权利要求52的药物组合物，其中所述胰岛素分泌细胞是组织相容性人化动物来源的。63.权利要求52的药物组合物，其中所述胰岛素分泌细胞分泌人胰岛素。64.权利要求52的药物组合物，其中所述胰岛素分泌细胞是自体细胞。65.权利要求52的药物组合物，其中所述细胞选自成纤维细胞，上皮细胞和角质化细胞。66.一种用于诱导或加速损伤的皮肤或皮肤创伤的愈合过程的药物组合物，所述药物组合物包括，作为活性成分的，设计用于转化所-->述皮肤创伤的细胞以产生和分泌胰岛素的核酸构建体，以及设计用于所述药物组合物局部施用的药学可接受的载体。67.权利要求66的药物组合物，其中所述创伤选自溃疡，糖尿病相关的创伤，烧伤，晒伤，老化皮肤创伤，角膜溃烂创伤，炎性胃肠道疾病创伤，肠炎性疾病创伤，克罗恩氏病创伤，溃疡性结肠炎，痔疮，大疱性表面松解症创伤，皮肤起疱创伤，牛皮癣创伤，动物皮肤创伤，动物糖尿病创伤，视网膜病创伤，口腔创伤(粘膜炎)，阴道粘膜炎创伤，牙龈病创伤，裂伤，手术切口创伤和手术后粘连创伤。68.权利要求67的方法，其中所述溃疡选自糖尿病性溃疡，褥疮，静脉溃疡，胃溃疡和HIV相关溃疡。69.权利要求66的药物组合物，其中所述细胞被重组PDX1基因转化，从而所述细胞产生和分泌天然胰岛素。70.权利要求66的药物组合物，其中所述细胞被顺式作用元件序列转化，该序列整合到所述细胞的内源胰岛素基因的上游，从而所述细胞产生和分泌天然胰岛素。71.权利要求66的药物组合物，其中所述细胞被重组胰岛素基因转化，从而所述细胞产生和分泌重组胰岛素。72.一种用于诱导或加速损伤的皮肤或皮肤创伤的愈合过程的药物组合物，所述药物组合物包括，作为活性成分的，设计用于转化所述皮肤创...

【专利技术属性】
技术研发人员：T藤兰鲍姆，S森普森，T库罗基，A阿尔特，S沈，
申请(专利权)人：巴尔伊兰大学，
类型：发明
国别省市：IL[以色列]