【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及检测领域，特别是涉及一种光激化学发光分析方法以及在测定试剂盒中的应用。
技术介绍
1、光激化学发光分析(luminescent oxygen channeling immunoassay，loci)为一种新型化学发光分析方法，已逐渐被临床实验室接受并得到一定程度的应用。此项技术与电化学发光、直接化学发光、酶促化学发光不同，采用发光物质(luminescentmaterial)和感光物质(photoactive substance)两种标记，两种微球之间借助抗原-抗体间结合，实现高能活性氧的传递，诱导光激发化学发光过程，从而实现“免分离”的均相免疫分析，精密度高，检测速度快。
2、光激化学发光的发光过程是一种由激光激发的化学发光过程。由酞氰、二甲基噻吩衍生物和镧系元素铕(eu)组成。酞氰作为感光物质分布于感光微球(gg)，酞氰接受激光照射(680nm)发生化学反应释放能量，促使周围氧分子活化变成“活性单线氧”。gg微球表面的活性氧携带能量向周围扩散，但因其半衰期短(4ms)，只能迁移200nm的距离。二甲基噻吩衍生物和铕(eu)分布于发光微球(fg)；二甲基噻吩衍生物可以接受活性氧的能量，诱导其发生连续化学反应产生紫外光(370-390nm)。紫外光可以作为荧光物质铕(eu)的激发光，eu发生能级跃迁至激发态，激发态不稳定回到基态并以荧光形式释放能量(610nm)。
3、光激化学发光分析为一种均相免疫分析系统，全程无需分离游离标记微球或未参加抗原抗体结合的标记物质。在光激化学发光分析中，发光物
4、现有光激发光方案，以双抗夹心免疫反应为例，使用两支抗体分别标记感光微球和发光微球，将样本(抗原)加入两个微球的溶液当中，形成感光微球-抗体1-抗原-抗体2-发光微球的复合物，以680nm光激发感光微球产生单线氧，单线氧激发发光微球产生610nm的光以供探测，这光值大小和抗原浓度呈正比(edwin f.ullman:"luminescent oxygenchanneling assay(loci)sensitive,broadly applicable homogeneous immunoassaymethod",《clinical chemistry》,vol.42,31december 1996(1996-12-31),pages1518-1526,xp002109518*edwin f.ullman:"luminescent oxygen channeling immunoassay:measurement of particle binding kinetics by chemiluminescence",《proc.natl.acad.sci.》,vol.91,30june 1994(1994-06-30),pages 5426-5430*)。
5、现有技术的光激发光由于免清洗的均相特性，配套仪器结构简单，是一种很适合应用于即时诊断(poct)的发光免疫方法。但是poct产品的应用场景多样，特别是环境温度的变化会对免疫反应产生影响，而光激发光是一种灵敏度很高的发光技术，更易受环境温度的影响造成测值不准。例如肌钙蛋白i的光激发光测试，环境温度30℃-15℃，测值分别为0.38-0.12ng/ml，降幅高达68％。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种光激化学发光分析方法以及在测定试剂盒中的应用，本专利技术在光激发光反应中嵌入一个平行的质控反应，使得主反应和质控反应产生同步变化，使得不同温度下的主反应与质控反应的比值一致，从而解决了温度变化对光激发光反应造成的测值偏差。
2、为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、本专利技术提供一种光激化学发光分析方法，在同一溶液中同时进行主反应和质控反应；
4、主反应形成的免疫复合物的激发光波长与质控反应的激发光波长一致，主反应形成的免疫复合物的发射光波长与质控反应的发射光波长不同；
5、以激发光波长的激光照射启动反应，分别采集主反应和质控反应的发射光信号即rlu值；
6、以不同浓度待测物进行反应，以待测物浓度为x，以反应比值为y进行线性拟合，获得校准曲线；
7、所述反应比值＝主反应rlu值/质控反应rlu值；
8、对待测样品进行反应，获得待测样品的反应比值y，根据校准曲线计算待测样品中待测物的浓度x。
9、优选的，当所述待测物为肌钙蛋白i时，主反应以肌钙蛋白i的第一抗体、肌钙蛋白i和肌钙蛋白i的第二抗体反应生成免疫复合物；质控反应以2,4-二硝基苯酚及其抗体反应生成免疫复合物。
10、优选的，主反应和质控反应的激发光波长为680nm；主反应发射光的波长为610nm，质控反应发射光的波长为545nm。
11、本专利技术还提供一种肌钙蛋白i检测试剂盒，包含主反应感光微球，主反应发光微球，质控感光微球，质控发光微球；所述主反应感光微球偶联ctni抗体1，主反应发光微球偶联ctni抗体2，质控感光微球偶联dnp，质控发光微球偶联抗dnp抗体。
12、本专利技术还提供所述肌钙蛋白i检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
13、1)将感光微球2份，发射波长为610nm的发光微球1份，发射波长为545nm的发光微球1份分别离心，去除上清；
14、2)分别将上述4份离心后的微球与活化缓冲液混合活化，再与edc溶液、sulfo-nhs溶液混合，孵育20～50min，离心，去除上清后；与偶联缓冲液混合；
15、3)将1份感光微球与ctni抗体1混合偶联获得主反应感光微球；
16、将另一份感光微球与dnp混合偶联获得质控感光微球；
17、将发射波长为610nm的发光微球与ctni抗体2混合偶联获得主反应发光微球；
18、将发射波长为545nm的发光微球与抗dnp抗体混合偶联获得质控反应发光微球。
19、优选的，所述活化缓冲液为ph为3～7的mes溶液。
20、优选的，所述偶联缓冲液为ph为7～10的bb-硼酸溶液。
21、与现有技术本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种光激化学发光分析方法，其特征在于，在同一溶液中同时进行主反应和质控反应；
2.根据权利要求1所述的光激化学发光分析方法，其特征在于，当所述待测物为肌钙蛋白I时，主反应以肌钙蛋白I的第一抗体、肌钙蛋白I和肌钙蛋白I的第二抗体反应生成免疫复合物；质控反应以2,4-二硝基苯酚及其抗体反应生成免疫复合物。
3.根据权利要求1或2所述的光激化学发光分析方法，其特征在于，主反应和质控反应的激发光波长为680nm；主反应发射光的波长为610nm，质控反应发射光的波长为545nm。
4.一种肌钙蛋白I检测试剂盒，其特征在于：包含主反应感光微球，主反应发光微球，质控感光微球，质控发光微球；所述主反应感光微球偶联cTnI抗体1，主反应发光微球偶联cTnI抗体2，质控感光微球偶联DNP，质控发光微球偶联抗DNP抗体。
5.权利要求4所述试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述试剂盒的制备方法，其特征在于，所述活化缓冲液为pH为3～7的MES溶液。
7.根据权利要求5所述试剂盒的制备方法，其特征在
...【技术特征摘要】
1.一种光激化学发光分析方法，其特征在于，在同一溶液中同时进行主反应和质控反应；
2.根据权利要求1所述的光激化学发光分析方法，其特征在于，当所述待测物为肌钙蛋白i时，主反应以肌钙蛋白i的第一抗体、肌钙蛋白i和肌钙蛋白i的第二抗体反应生成免疫复合物；质控反应以2,4-二硝基苯酚及其抗体反应生成免疫复合物。
3.根据权利要求1或2所述的光激化学发光分析方法，其特征在于，主反应和质控反应的激发光波长为680nm；主反应发射光的波长为610nm，质控反应发射光的波长为545nm。
4.一种...
【专利技术属性】
技术研发人员：周龙甫，陈欣，袁志国，刘海博，殷悦，
申请(专利权)人：中国人民解放军西部战区总医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。