一种用于检测衰老细胞的双响应逻辑门荧光探针的制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种用于检测衰老细胞的双响应逻辑门荧光探针的制备方法及应用，涉及衰老细胞检测技术领域；本发明专利技术提供了该荧光探针的结构式，并给出了荧光探针的制备方法。本发明专利技术以β‑半乳糖苷酶(β‑Gal)作为第一识别物，同时引入衰老过程中发生过量累积的次氯酸根作为第二个衰老识别物，以香豆素与罗丹荧作为荧光团，哌嗪作为连接基团，通过顺序引入酰肼基团(次氯酸根响应位点)与β‑半乳糖苷残基(β‑Gal响应位点)构建了一个“And”型双响应逻辑门探针。本发明专利技术的荧光探针用于评估细胞的衰老情况，以解决目前单一响应衰老探针识别能力不足(对细胞衰老状态评估不准确)的问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及衰老细胞检测，具体涉及一种用于检测衰老细胞的双响应逻辑门荧光探针的制备方法及应用。

技术介绍

1、细胞衰老(cellular senescence)作为微观上衰老的主要表现形式之一，是细胞应对压力的一种重要手段。当细胞长时间处于一定压力而又无法及时修复或启动凋亡时，细胞就会进入衰老进程，表现为永久性的细胞周期终止。细胞衰老最早的实例是在1961年由hayflick等人报道，他们发现在体外培养的人正常二倍体成纤维细胞经过多次传代后，即便为其提供充分的空间与足够的营养，细胞的数目也不会继续增加，这种衰老类型而后被定义为复制性衰老(replicated senescence)。另一种重要的细胞衰老类型为应激诱导的过早衰老(stress-induced premature senescence)，其可以由多种因素诱发，如dna损伤、氧化应激、炎症或药物刺激等。开发普适的衰老检测方法，对准确标记衰老与评估衰老进程具有重要意义。

2、荧光探针是近年来被广泛应用于生化研究中的强力工具，因其具有快速、无损、灵敏度高等特点，其已经被应用于多个领域中本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于检测衰老细胞的双响应逻辑门荧光探针，其特征在于，其结构式为：

2.权利要求1所述的用于检测衰老细胞的双响应逻辑门荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.如权利要求2所述的用于检测衰老细胞的双响应逻辑门荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，7-(二乙胺基)-2-氧代-2-苯并吡喃-3-羧酸、N-羟基琥珀酰亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐摩尔比为19.1-19.3:22.5-23.0:19.1-19.3。

4.如权利要求2所述的用于检测衰老细胞的双响应逻辑门荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，...

【技术特征摘要】

1.一种用于检测衰老细胞的双响应逻辑门荧光探针，其特征在于，其结构式为：

2.权利要求1所述的用于检测衰老细胞的双响应逻辑门荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.如权利要求2所述的用于检测衰老细胞的双响应逻辑门荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，7-(二乙胺基)-2-氧代-2-苯并吡喃-3-羧酸、n-羟基琥珀酰亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐摩尔比为19.1-19.3:22.5-23.0:19.1-19.3。

4.如权利要求2所述的用于检测衰老细胞的双响应逻辑门荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，先后两次加入等量荧光素，且第一次加入荧光素和氢氧化钠水溶液摩尔体积比为15.0-15.5:70-75mmol/ml。

5.如权利要求2所述的用于检测衰老细胞的双...

【专利技术属性】
技术研发人员：于抗抗，李坤，吴思娴，余孝其，许文明，单益民，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：